ELISA na virovou hepatitidu

9. března 2017, 16:25 Odborné články: Nová Vladislavovna Izvochkova 0 3,608

K detekci virové hepatitidy v těle, medicína široce používá enzymový imunotest založený na detekci koncentrace a typu antigenů s použitím protilátek a enzymů. Provádí se po etapách laboratorním výzkumem s vysokou přesností indikací. V závislosti na množství a třídě protilátek, barva a koncentrace enzymu, který používá ELISA, a v důsledku toho lékař diagnostikuje onemocnění, změny.

Co je ELISA?

Přítomnost virové hepatitidy v těle pacienta se stanoví sérologickou metodou analýzy krve na přítomnost viru HCV a markerů (těl a protilátek), které jej označují. Test ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) zkoumá různé viry, sloučeniny s nízkou molekulovou hmotností, makromolekuly, jejich kvalitativní a kvantitativní ukazatele s využitím projevu reakce na jejich antigeny. K tomu použijte enzym jako označení pro registraci signálu. Je stále více používán v medicíně, protože ELISA jasně zjistí, že dobře definované antigeny, aniž by je zaměňovaly s ostatními, mají vysokou citlivost na přítomnost invaze ve virové hepatitidě.

Nevýhodou takové diagnózy je neschopnost identifikovat příčinu onemocnění, protože tato metoda pouze indikuje reakci imunitního systému těla. Výsledky analýzy jsou ovlivněny dříve provedeným očkováním. 8 hodin před analýzou se doporučuje zdržet se konzumace nikotinu, alkoholu. Základem testu ELISA je enzymatická a imunitní reakce organismu na virus. Biologické molekuly se váží na buňku a její elementy, mikroorganismy, detekují virus, pak pracují s enzymy, které umožňují vyjádřit imunitní reakci viditelným a měřitelným parametrem.

Indikace pro analýzu

Virová hepatitida v těle může způsobit rakovinu a jaterní cirhózu. Význam včasné diagnózy je nesporný. Primární metodou diagnostiky je test ELISA, který s vysokou přesností určuje přítomnost viru HCV (IgM a IgG) a aktivity jeho stopových prvků. Povinné testy na průchod virové hepatitidy:

  1. Lidé s rizikovými skupinami (drogově závislí, lidé s AIDS, zaměstnanci zdravotnických a donucovacích institucí).
  2. Lidé s akutní nebo chronickou hepatitidou.
  3. Těhotné a plánování těhotenství ženy.

ELISA rozpoznává nemoc v kterémkoli stadiu. Výsledky analýzy jsou v průměru připraveny za 2 dny.

Kritéria, která určují důležitost analýzy

Test ELISA určuje přítomnost protilátek třídy IgG, IgM, IgA. Při diagnóze virové hepatitidy lékař nevěnuje pozornost jejich typu, protože přítomnost jakéhokoli takového projevu viru HCV již indikuje akutní nebo chronické stadium onemocnění. V počátečních stadiích onemocnění se hladina IgM zvyšuje (5 dní po infekci); 15. - 20. den se objevují protilátky IgG a mohou zůstat v lidské krvi po dlouhou dobu i po vyléčení; IgA - objeví se po 10-14 dnech, po léčbě klesá.

Pokud jsou IgG a IgA detekovány po užití léků a jejich hladina zůstává ve stejné míře - nosič má chronickou formu hepatitidy. Důležitým kritériem testu bude jasné vymezení třídy dostupných protilátek a jejich množství. Na základě toho můžete vědět nejen o přítomnosti nemoci, ale také o stadiu jejího vývoje. Detekce takových prvků v krvi pacienta umožňuje předepsat správnou a včasnou léčbu, aby se zabránilo závažnějším následkům.

Jak se to dělá?

Přidělit přímý a nikoli přímý test ELISA. Fáze přímo:

  1. Sběr biologického materiálu a jeho umístění do speciálních otvorů.
  2. Během 15-30 minut antigeny jsou připojeny k povrchu jamek.
  3. Přidání protilátek do jamek k nalezenému antigenu. Vše se nechalo 1-5 hodin.
  4. Odstraňte nepřipojené antigeny (nalití obsahu jamek).
  5. Jamky opláchněte speciálním roztokem.
  6. Do jamek se přidá roztok enzymu. Nechte 30 minut - 1 hodinu.
  7. Využití kolorimetrie (detekce barvy a koncentrace barvy obsahu jamky, porovnání s ukazateli, které jsou přímo úměrné koncentraci viru).
Použití pro diagnózu nepřímé ELISA poskytne přesnější výsledek.

Nepřímá metoda ELISA se provádí s použitím neznačených protilátek proti zjištěným antigenům a následnému přidání značených protilátek. Nejprve se pacientovi odebere krev a 15 až 30 minut se rozetře do jamek. (protilátky jsou fixovány otvory). Pak se do nich zavedou neznačené protilátky po dobu 1–5 hodin (vznikne spojení protilátek s antigeny - imunitní komplex). Následně se z jamek nalijí nenavázané mikroelementy a promyjí se speciálním roztokem. V další fázi laboratorní technik přidá značené stopové prvky do jamek po dobu 15-30 minut. (toto se váže neoznačené značením s tvorbou komplexu "protilátka-protilátka-antigen"). Extra (volné) se znovu odstraní během vypouštění a promývání roztokem. Další je enzym, který mění barvu během 5-30 minut. zůstatky v dírách a barevná data jsou porovnána s údaji tabulkových ukazatelů. Nepřímá ELISA je přesnější.

Co ukazuje ELISA na virovou hepatitidu?

Imunotest umožňuje detekci přítomnosti infekce (viry hepatitidy všeho druhu, HIV, herpes, syfilis, cytomegalovirus, spalničky, zarděnka, virus příušnic, virus Epstein-Barr), je markerem autoimunitních onemocnění, rakovinných buněk. Označuje porušování reprodukčních funkcí (změny v testosteronu, prolaktinu, estradiolu a progesteronu), poruchy funkce štítné žlázy, napadení hlísty, chlamydie. Účinný pro detekci ureaplasmózy, černého kašle, viru Dange, viru West Nile, Borrelia. Seznam definic je vysoký, obsahuje mnoho položek.

Potvrzení výsledků

Stanovení antigenu viru HCV metodou ELISA poskytuje 98% přesnost. Používá se také k přezkoušení biologického materiálu s fuzzy předchozími indikátory. Přítomnost IgM antigenů není indikátorem akutní hepatitidy a vyžaduje další výzkum. Při opakovaném testu ELISA se výsledky shodují o 90–100%. V případech minimálního rozdílu se průměrná hodnota bere jako ukazatel. Pro maximální přesnost, pokud jde o lékaře, radí paralelně provádět biochemickou analýzu krve. Pro testování výsledků po enzymové imunoanalýze můžete použít jiné diagnostické metody.

Výzkum virové hepatitidy metodou ife

ELISA v diagnostice virové hepatitidy. Enzymové imunoanalýzy

Specifická laboratorní diagnostika virové hepatitidy je založena na použití imunochemických a molekulárně biologických výzkumných metod. Hlavními imunochemickými metodami jsou radioizotopy nebo radioimunní (RIA) a imunoanalýzy (ELISA). Imunochemické diagnostické metody jsou založeny na specifické interakci antigenu - protilátky s následnou identifikací komplexu pomocí speciálních značek. Nejběžnější enzymový imunotest.

První zprávy o použití enzymového imunotestu. jako metodu pro stanovení všech látek byly v roce 1971 publikovány dvě výzkumné skupiny - B. Van Weemen, A. Schuurs a E. Engvall, P. Perlmann. Enzymová imunoanalýza je založena na následujícím principu: na pevné fázi, která používá hlavně povrch jamek polystyrenové tablety, je fixován antigen infekčního agens nebo protilátky (často směs protilátek) na antigeny, které mají být detekovány. Tento antigen nebo protilátky, které jsou fixovány na pevné fázi, se nazývají imunosorbent.

V důsledku inkubace imunosorbentu a testovaného séra v přítomnosti detekovatelného činidla jsou navázány na komplex antigen - protilátka. Po promývacím postupu, během kterého byly odstraněny nevázané antigeny a protilátky, se provede inkubace s konjugátem. Jako konjugát pro detekci HBsAg se používají anti-HBs, při detekci protilátek proti viru hepatitidy C - protilátky proti lidským imunoglobulinům (konjugát antivirů) značený křenovou peroxidázou. Výsledkem této inkubace je navázání na již existující komplexy antigenů - protilátka dodatečně zavedeného konjugátu. Po odstranění nenavázaného konjugátu (promytí) se substrát zavede do jamek. Pokud se používá peroxidázový konjugát, používá se peroxid vodíku jako substrát v kombinaci s indikátorem, který se nejčastěji používá jako orto-fenylendiamin (OPD) nebo tetramethylbenzidin (TMB). Výsledek se odhaduje fotometricky.

Kvalita a spolehlivost analytických schopností metody enzymového imunoanalýzy je charakterizována řadou kritérií, mezi něž patří citlivost, specificita, přesnost a reprodukovatelnost.

Citlivost je minimální množství látky, které může být detekováno enzymovým imunotestem. V tomto případě je dolní hranicí citlivosti této metody koncentrace zkoušené látky ve vzorku, která odpovídá nejmenšímu pozitivnímu výsledku stanovení, který je statisticky významně odlišný od ukazatelů záměrně negativních vzorků. Citlivost IFTS závisí na řadě okolností, které se týkají jak designu testovacího systému (afinita imunosorbentu, kvality extrakčních a pufrových systémů), tak rozlišení a přesnosti metody registrace.

Specifičnost - schopnost přesně určit složky, pro jejichž stanovení je tento enzymový imunotest určen. Specifičnost ELISA je do značné míry určena zkříženou reakcí protilátek nebo antigenů (tj. Kompozice používaná jako imunosorbent) s blízce příbuznými sloučeninami, jakož i složení inkubačního média (matricový efekt).

Správnost - odpovídá průměrné hodnotě výsledků opakovaných stanovení stejného kontrolního vzorku se skutečnou hodnotou měřeného parametru. Přesnost stanovení v testu ELISA závisí na kvalitě testovacího systému a kontrolního vzorku. U dobrých imunoanalytických testovacích systémů jsou ukazatele správnosti v rozmezí 90-110%. Zvláštností biomedicínského výzkumu v ELISA je nemožnost stanovení přesné hodnoty, a proto se za skutečnou hodnotu považuje průměr několika odborných laboratoří. Statistickým kritériem pro správnost je aritmetický průměr a míra jeho odchylky od skutečné hodnoty vyjádřené v procentech.

Reprodukovatelnost - schopnost zkušebního systému vykazovat stejné hodnoty při opakovaných studiích stejného vzorku. Reprodukovatelnost závisí jak na náhodných chybách (chybách) během postupu reakce, tak na kvalitě testovacích systémů a přesnosti metody zaznamenávání výsledků. Předpokládá se, že reprodukovatelnost stejných kontrolních vzorků stejné společnosti v různých laboratořích by neměla překročit hodnotu variačního koeficientu 15%.

Existuje několik specifických schémat ELISA pro stanovení markerů virové hepatitidy: a) přímý enzymový imunotest; b) nepřímý enzymový imunotest; c) kompetitivní inhibici; c) metoda „trap“ nebo „capture“.

Z molekulárně biologických metod pro diagnostiku virové hepatitidy se běžně používá polymerázová řetězová reakce a hybridizace. Tyto metody, zejména PCR, umožňují detekovat velmi malá množství specifické virové DNA nebo RNA, a tedy replikační aktivitu a v některých případech i replikační aktivitu.

Hepatitida C krevní test

Hepatitida C je jedním z nejčastějších onemocnění jater, která se vyskytují, když jsou infikována virem hepatitidy C (HCV), který vstupuje do těla především při styku s krví infikované osoby. Vyskytuje se chronická a akutní hepatitida C. U 70-80% pacientů s akutní hepatitidou C nejsou příznaky nemoci, pouze v některých případech po určité době po infekci se projevují projevy onemocnění, které jsou vyjádřeny únavou, bolestí břicha, ztrátou chuti k jídlu, ztmavnutím. moč, zvracení, nevolnost, zeslabení výkalů, žloutenka, bolest v kloubech. Příznaky se zpravidla vyskytují 6-7 týdnů po infekci, ale doba trvání příznaků onemocnění se pohybuje od 2 týdnů do šesti měsíců. Pokud se objeví výše uvedené příznaky, musíte se poradit s lékařem infekčních nemocí a provést krevní test na hepatitidu C. Diagnóza hepatitidy, prováděná včas, může detekovat nemoc v raném stádiu a významně zvýšit šance na zotavení.

Když je naplánován test hepatitidy C.

Situace, kdy je vyžadován test hepatitidy C:

  • během těhotenství a plánovaného rodičovství;
  • pacienti se symptomy chronické nebo akutní hepatitidy;
  • osoba je ohrožena. Jedná se o zdravotnické pracovníky, osoby ve vězení, donucovací orgány, osoby, které užívají drogy, mají velký počet sexuálních partnerů, mají AIDS, jsou na hemodialýze a další.

Příprava na analýzu hepatitidy C

Zvláštní příprava na analýzu hepatitidy C není nutná. Pro analýzu se odebírá krev ze žíly na lačný žaludek a současně by mělo uplynout nejméně osm hodin po posledním jídle.

Testy ELISA na hepatitidu C

První analýza, obvykle předepsaná pro diagnózu hepatitidy C - ELISA test (enzymově spojený imunosorbentní test). Testy ELISA na hepatitidu C umožňují detekci přítomnosti protilátek proti viru hepatitidy C (anti-HCVAb) v krvi. Pokud je výsledek testu ELISA pozitivní, znamená to, že je přítomen kontakt těla s virem hepatitidy C. Ale 40% lidí, kteří mají pozitivní ELISA, nedetekují virus v krvi. Tento jev se nazývá falešně pozitivní výsledek. Také pomocí ELISA se kontroluje dárcovská krev.

RIBA pro hepatitidu C

Analýza RIBA pro hepatitidu C se používá k potvrzení pozitivního výsledku ELISA. Metoda rekombinantní imunoblotingu (RIBA) je přesnější studium přítomnosti protilátek proti viru hepatitidy C. Přítomnost viru hepatitidy C v těle také neurčuje pozitivní výsledek, ale pouze potvrzuje přítomnost protilátek.

Testy PCR na hepatitidu C

Za účelem zjištění přítomnosti virů hepatitidy C v krvi (HCV RNA) a stanovení diagnózy nejčastěji používají analýzu metodou polymerázové řetězové reakce (PCR). Tato studie umožňuje s vysokou přesností detekovat přítomnost i malého množství viru v krvi. PCR analýza hepatitidy C může odhalit přítomnost viru již 5 dní po infekci, dlouho před výskytem protilátek. Pokud je výsledek PCR analýzy pozitivní, znamená to přítomnost aktivní infekce.

Existují takové varianty analýzy PCR:

  • kvantitativní PCR, která umožňuje určit nejen přítomnost viru, ale také virovou zátěž (množství viru). Tento ukazatel má velký význam pro určení účinnosti léčby;
  • genotyp, který určuje genotyp viru hepatitidy C, který je důležitý pro stanovení doby trvání a taktiky léčby. Existuje více než 10 genotypů viru hepatitidy C, ale pro klinickou praxi stačí definovat pět nejběžnějších typů: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Byla provedena kvantitativní analýza PCR:

  • kvalitativním pozitivním testem na přítomnost RNA viru hepatitidy C v séru;
  • pro přesné posouzení účinnosti léčby;
  • stanovit taktiku léčby pacienta.

Neexistuje přímý vztah mezi závažností hepatitidy C a množstvím viru v krvi. Koncentrace viru ovlivňuje infekčnost onemocnění, tj. Čím větší je množství viru v krvi pacienta, tím větší je riziko přenosu viru, například pohlavním stykem nebo z matky na dítě. Účinnost léčby závisí také na koncentraci viru. Během terapie je příznivým faktorem nízká virová zátěž a velmi vysoká je nepříznivá.

Analýza genotypizace se provádí:

  • kvalitativním pozitivním testem na přítomnost RNA viru hepatitidy C v séru;
  • pro přesné posouzení účinnosti léčby;
  • stanovit taktiku léčby pacienta;
  • předvídat chronizaci infekčního procesu;
  • pro stanovení progrese onemocnění.

Detekce genotypu viru má velký význam pro stanovení délky léčby, což je důležité, protože interferon má široké spektrum vedlejších účinků a nízkou toleranci pacienta.

Dekódovací analýza pro hepatitidu C

Obvykle chybí RNA RNA, protilátky proti nim a antigeny. Přítomnost protilátek v krvi indikuje přítomnost chronické nebo akutní hepatitidy C nebo doby zotavení. Pokud je v krvi přítomna HCV RNA, která je stanovena PCR analýzou, znamená to přítomnost viru v krvi.

Při nesprávné zkušební technice, transportu a abnormalitách krve může analýza PCR někdy vykazovat falešně pozitivní výsledky. Analýzy ELISA a RIBA v raných stadiích onemocnění, kdy tělo dosud nevyprodukovalo dostatečné množství protilátek, mohou vykazovat falešně negativní výsledek.

Pokud se při dešifrování testu na hepatitidu C získají pozitivní výsledky, je nutné kontaktovat lékaře s infekčním onemocněním a gastroenterologa pro další diagnostiku a léčbu.

Segmentované neutrofily se snížily

Dětské destičky jsou normální, zvýšené, snížené

Hormon stimulující štítnou žlázu TGT

Diagnostika hepatitidy

Nelze okamžitě zjistit přítomnost hepatitidy v těle, protože inkubační doba onemocnění může trvat až čtyři týdny. Když se objeví první známky onemocnění, v postiženém organismu dochází k radikálním změnám ve složení krve: biochemická analýza vykazuje závažný zdravotní problém a přítomnost patogenního viru. Abychom však učinili konečnou diagnózu, nestačí darovat krev pro hepatitidu, stejně jako podrobnou diagnózu hepatitidy.

Laboratorní diagnostika hepatitidy

Je žádoucí provést ji po skončení inkubační doby, aby lékař s maximální přesností mohl určit onemocnění jater přítomné v těle. V opačném případě předepsaná léčba neposkytne požadovaný terapeutický účinek a dokonce zhorší převažující klinický obraz.

Diagnostika hepatitidy A

Diagnóza hepatitidy A obvykle začíná podrobným dotazováním pacienta a jmenováním řady testů, které musí být provedeny co nejdříve. To je:

  • biochemický krevní test;
  • kompletní krevní obraz;
  • PCR metoda;
  • ELISA;
  • coagulogram.

Pokud Botkinova choroba postupuje, pak je pozorován abnormální skok bilirubinu, AlAT a AsAT, vzorku thymolu podle výsledků biochemické analýzy krve. Navíc jsou produkovány specifické anti-HAV IgM, které jsou nezvratnou skutečností o přítomnosti hepatitidy A.
Analýza krve je obecně určena poklesem leukocytů, skokem v ESR a lymfocytózou. A nejspolehlivější je však metoda PCR, která určuje ukazatel RNA patogenního viru.
Kromě toho lékař studuje příznaky onemocnění, po kterém může učinit konečnou diagnózu a prorazit k nejúčinnější terapii. Potřeba instrumentálního vyšetření je velmi vzácná. Po úspěšné konzervativní léčbě v podmínkách hospitalizace a karantény pacienta čeká konečné uzdravení a hepatitida A se znovu nevyskytuje.

Diagnostika hepatitidy B

Stanovení přítomnosti viru hepatitidy B je také možné podle výsledků laboratorních testů, a proto je první věc potřebná k darování krve na hepatitidu. Patogenní virus má přirozeně tři hlavní antigeny - HBsAg, HBcAg a HBeAg, na které se v těle produkují protilátky. Hlavním rysem tohoto klinického obrazu je ELISA - ELISA, která právě odhaluje specifické markery hepatitidy B.
Ihned by mělo být objasněno, že antigen HBsAg se objevuje v krvi ještě před prvními příznaky hepatitidy a je spolehlivě stanoven v období ikteriky. Negativní test však nevylučuje přítomnost hepatitidy B, a proto vyžaduje použití stejně účinné metody polymerázové řetězové reakce (PCR).
Pokud máte podezření, že hepatitida B je povinná, je biochemický krevní test, který se doporučuje projít na prvním místě. Provádění biopsie jater a ultrazvuku peritoneálních orgánů je diskutováno individuálně, ale pokud je historie onemocnění velmi jasná, není třeba používat metody klinického vyšetření.

Jaterní echogram u autoimunitní hepatitidy ve stadiu chronické hepatitidy

Diagnostika hepatitidy C

K tomu, aby se tato diagnóza, nestačí darovat krev na hepatitidu, protože virus může převažovat v těle v latentní formě. Hlavními laboratorními testy jsou však všechny výše uvedené analýzy a také další výkon biopsie jater. Toto mikroskopické vyšetření biologického materiálu (v našem případě kus jaterní tkáně) určuje rozsah patologického procesu a tkáňové fibrózy. Odběr vzorků se provádí za lokálních anestetik, komplikace tohoto postupu jsou v lékařské praxi velmi vzácné.
Pokud je podezření na hepatitidu C, hlavní metodou klinického vyšetření je ultrazvuk peritoneálních orgánů. Důvod je jednoduchý: onemocnění se často projevuje vizuální změnou v postižených játrech, změnami v jeho struktuře a velikosti. Tímto způsobem můžete určit:

  • velikost jater, sleziny, slinivky břišní a žlučníku;
  • patologické změny v těchto orgánech;
  • celkový průtok krve v peritoneálních orgánech;
  • optimální prostor pro provádění biopsie jater.

Tato metoda klinického vyšetření určuje všechny fokální patologie orgánu na mikroskopické úrovni. Pokud jsou játra na obrazovce zobrazena v šedé škále, je nutná okamžitá biopsie, protože šedá barva zobrazuje postižené tkáně „lidského filtru“.

Prevence hepatitidy

Vzhledem k tomu, že se choroba neprojevuje okamžitě, není daleko od všech klinických snímků, které se dostanou k okamžité léčbě. Pacient si prostě nemůže být vědom toho, že v těle existuje patogenní virus, který se rychle šíří do krevního oběhu a infikuje zdravé jaterní buňky.
Aby se zabránilo takovému tragickému osudu, doporučuje se dodržovat všechna preventivní opatření. Taková ostražitost významně sníží riziko morbidity a zachrání vás před vážnými zdravotními problémy v budoucnu. Základní pravidla prevence jsou uvedena níže:

  • umývej si ruce po ulici;
  • vysoce kvalitní zpracování čerstvé zeleniny a ovoce;
  • provádět všechna preventivní očkování uvedená v ročním plánu;
  • selektivní přístup k sexuálním partnerům;
  • vyhnout se kontaktu s nemocnými lidmi;
  • používat pouze jednorázové injekční stříkačky a být zvláště ostražitý ve stanicích krevní transfúze.

Doporučuje se také pravidelně (jednou za šest měsíců) darovat krev na hepatitidu, aby se zajistilo, že virus nepronikne do těla a neinfikuje jednou zdravé buňky jater. Je-li stanovena diagnóza, je nutné okamžitě se stát výdejním účtem a dodržovat všechna doporučení specialisty.

Autor publikace:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Vzdělání: Státní lékařská univerzita v Rostově (Rostovská státní lékařská univerzita), Katedra gastroenterologie a endoskopie.
Gastroenterolog
Lékař lékařských věd

Metoda ELISA pro detekci hepatitidy

Moderní medicína je známá mnoha chorobami jater. HCV (virová hepatitida C) patří mezi nejčastější a nejnebezpečnější, protože tato infekce se často vyvíjí asymptomaticky a vede ke kritickým komplikacím, dokonce i ke smrti. Proto je velmi důležitá včasná diagnostika onemocnění, která se provádí různými metodami, včetně enzymového imunosorbentního testu (ELISA) pro detekci protilátek proti viru v krvi.

Prohlášení o infekci HCV pro diagnostiku hepatitidy

V laboratorní diagnostice pro detekci hepatitidy C (HCV infekce) se používají dva typy metod:

  1. Sérologické, založené na detekci protilátek proti viru hepatitidy C (anti-HCV), také nazývané ELISA (enzymově spojený imunosorbentní test). Je zaměřen na detekci anti-HCV (IgM a IgG markerů) používaných pro screening a diagnostiku hepatitidy C. Oba tyto markery mohou být detekovány v krvi (plazmě) v různých kombinacích, což vyžaduje řádný klinický výklad. Pro potvrzení přítomnosti anti-HCV se provádí test RIBA (rekombinantní imunoblot).
  2. Molekulárně biologické, zaměřené na detekci RNA viru. Test HCV RNA je předepsán pro následující kategorie pacientů:
    • s identifikovanou anti-HCV;
    • bez detekované anti-HCV, ale se zavedenými epidemiologickými a klinickými údaji vyžadujícími vyloučení akutní formy HCV.

RNA viru může být detekována v krvi již 14 dní po infekci, to znamená před výskytem anti-HCV, ke kterému dochází během prvních 2-3 měsíců.

Pro konečné potvrzení diagnózy (zejména pokud je detekován pouze jeden ze dvou markerů HCV infekce) odborníci doporučují, aby po určité době byly provedeny opakované testy anti-HCV a HCV RNA.

Detekce hepatitidy metodou ELISA

Pro implementaci časné diagnózy virové hepatitidy, zejména asymptomatických forem, v séru, jsou detekovány přítomnost virových proteinů (antigenů) nebo protilátek proti nim (produkovaných imunitním systémem, kdy viry vstupují do těla) pomocí enzymového imunoanalýzového testu (ELISA). Toto je univerzální metoda imunologické diagnostiky, její podstata spočívá ve studiu interakce "antigen-protilátka". Je široce používán v mnoha zemích světa.

Stanovení hepatitidy metodou ELISA umožňuje nejen stanovit přesnou diagnózu, ale také posoudit povahu onemocnění a také zvolit kompetentní a účinnou léčbu pomocí tradičních léků (interferon, ribavirin), léků s přímým účinkem (Sofosbuvir, Daclatasvir) a jejich generik indické a čínské produkce.

Kdykoli je to možné, diagnóza virové hepatitidy pomocí ELISA je doplněna PCR (polymerázová řetězová reakce), která umožňuje stanovit přítomnost virů hepatitidy v RNA.

Jak přesná je metoda enzymového imunoanalýzy

Podle expertních odhadů je přesnost metody ELISA 95%, tj. U 95 ze 100 pacientů, kteří používají enzymové imunoanalýzy, lze v krvi detekovat přítomnost a množství HCV protilátek - IgM a IgG. Pokud je výsledek pozitivní, je možné diagnostikovat HCV kontakt s tělem (nikoli samotný virus, totiž přítomnost protilátek v krvi, které mohou být výsledkem již přenesené choroby).

Nicméně navzdory vysoké citlivosti testu ELISA (enzym-linked immunosorbent assay) u 40% pacientů s pozitivním výsledkem nemusí být virus detekován, což naznačuje pochybný nebo falešně pozitivní výsledek.

Pro potvrzení správnosti výsledků ELISA se pro přesnější studium detekce protilátek proti HCV používá metoda RIBA (rekombinantní imunoblotování).

Anti NCV jádrový test

Účinné studie pro stanovení přítomnosti protilátek proti virům hepatitidy zahrnují jádro anti-HCV, které se používá jako potvrzovací test, když se získají „nejisté“ výsledky.

Pokud je jádro anti-HCV detekováno v séru při ředění 1: 1000, je pravděpodobné, že bude diagnostikován pozitivní výsledek, to znamená, že onemocnění je přítomno.

Jsou-li vzorky v ředění 1: 1000 negativní, v ředění 1: 200 jsou pozitivní, je nutný výzkum na přítomnost virové RNA. V tomto případě s největší pravděpodobností neexistuje infekce HCV.

Je důležité si uvědomit, že u chronických forem HCV jsou protilátky neustále detekovány a během eliminace (odstranění z buněk těla) viru přetrvávají 4–8 let nebo více. Přítomnost anti-HCV tedy ne vždy indikuje infekci organismu a neumožňuje objektivně vyvodit závěry o aktivitě procesu, aby bylo možné získat přesné údaje o virové zátěži, stupni poškození jater, délce trvání infekce a rozdílu mezi akutními a chronickými formami onemocnění. peptidy. Je také důležité sledovat jejich kvantitativní a kvalitativní dynamiku.

Analýza ELISA - od screeningu na HbsAg až po komplexní diagnostiku

Se zavedením moderních technologií v medicíně rostou možnosti imunochemických diagnostických metod, které jsou schopny rychle a přesně rozpoznat nemoc, když jsou jiné metody bezmocné. Pochopení, že virus hepatitidy B je schopen být v těle ve velmi nízké koncentraci, při které nemůže být detekován ani tak spolehlivou metodou, jako je PCR, vyžaduje, aby se znovu podíval na problém diagnostiky této nemoci a ocenil možnosti imunotestu.

V tomto materiálu podrobně analyzujeme vše, co se týká tohoto typu laboratorního výzkumu. Dozvíte se, co je enzymová imunoanalýza a jak se provádí, co je australský antigen a jak se určuje, jaké jsou nesrozumitelné zkratky Hbs ag, Hbcor, v průměru a jejich úloha při rozluštění analýzy a také spoustu užitečných a zajímavých informací.

Obsah článku:

Obecné informace o testu ELISA

ELISA (zkrácená ELISA) je laboratorní diagnostická metoda, která dokáže detekovat jak antigeny, tak protilátky proti širokému spektru infekcí, včetně hepatitidy B. Současná znalost vlastností viru a vlastností imunitní reakce organismu umožňuje nejen detekci infekce, ale také její identifikaci účinnost očkování a hodnotí účinnost léčby.

Podstata enzymového imunotestu

ELISA je založena na reakci „antigen-protilátka“ nebo spíše na jejích vlastnostech.

V odezvě na invazi cizí látky (antigenu), která jsou zejména proteiny viru, produkuje tělo proteiny proteiny - protilátky. Protilátky vstupují do komplexní reakce s antigenem, blokují jeho aktivitu.

Budeme hovořit více o antigenech a protilátkách níže, ale nyní si všimneme, že pro každý antigen jsou přísně individuální nebo jako lékaři říkají homologní protilátky. Pokud tedy chceme detekovat specifický antigen v krvi, použijeme diagnostickou tabletu s protilátkami. Pokud je v krvi antigen, bude reagovat s protilátkami, které mohou být detekovány různými způsoby. A naopak. Pokud chceme najít nějaké protilátky, pak potřebujeme tabletu s příslušným antigenem.

Nejčastěji diagnostická hodnota nese pouze protilátky, se kterými můžete diagnostikovat téměř jakoukoli infekci. Zvláštností viru hepatitidy B je však to, že hlavní úlohu v diagnostice hraje jeden z antigenů - australský antigen.

Jak je IFA

Zvažte typický postup ELISA pro konkrétní příklad, pokud chcete identifikovat protilátky proti patogenu.

Pro diagnostiku se použije tableta s 96 jamkami, které jsou předem nasyceny odpovídajícím antigenem. Postup je následující:

sérum se aplikuje na všechny buňky;

homologní protilátky reagují s antigenem a připojují se k destičce;

tableta promyta, odstraní se nepřipojené protilátky;

pak je do buněk zavedena enzymatická značka - látka, která reaguje s protilátkami a způsobuje zbarvení obsahu buňky.

Jedná se o standardní postup ELISA s barvením, který se používá například v imunochromatografických testovacích proužcích.

ELISA není omezena na kvalitativní stanovení protilátek nebo antigenů patogenu. Čím více protilátek je obsaženo v buňkách tablety, tím intenzivnější je zbarvený roztok. Porovnáním jeho optické hustoty s řízením může moderní zařízení přesně vypočítat koncentraci protilátek na jednotku objemu. Proto se provádí kvantitativní ELISA, míra měření, při které jsou nejčastěji jednotky optické hustoty (EOP).

Imunochemiluminiscenční analýza

Dnes existuje několik desítek typů ELISA, z nichž každá má preferovaný rozsah. Nejoblíbenější v diagnóze hepatitidy B je imunochemiluminiscenční analýza.

Enzymatická značka pro tuto analýzu nejsou chromatiny, jako ve standardní ELISA, ale speciální látky - fosfory, které způsobují, že komplex svítí v ultrafialovém světle.

Pomocí speciálního zařízení - luminometru můžete přesně určit úroveň emisí a tím i koncentraci požadované látky.

Metody ELISA určují téměř všechny existující antigeny viru hepatitidy B a protilátky proti nim.

Antigeny viru hepatitidy B: Hbs, Hbe a Hbc

Termín antigen (antigen) pochází ze dvou anglických slov: protilátka - protilátka a generátor - výrobce. Pod antigenem tedy rozumí jakékoli látce, která jí způsobuje tvorbu protilátek v těle. Nejběžnějšími antigeny jsou proteinové sloučeniny.

Dnes jsou známy tři antigeny viru hepatitidy B: hbsag, hbc a hbe.

Australský antigen

Protein, který je součástí vnějšího obalu patogenní hepatitidy B, byl detekován dlouho před objevením samotného viru. Tento antigen dostal své jméno, protože byl poprvé identifikován od domorodých obyvatel Austrálie. Zpočátku však protein nebyl považován za antigen, ale zcela přirozený prvek krve mezi domorodci a vědomí jeho spojení s onemocněním jater přišlo o něco později.

Dlouhodobá konzervace antigenu v krvi a absence protilátek indikují možnost vzniku chronické hepatitidy B pozitivní na HBeAg.

V odborné literatuře se v současné době název „australský antigen“ prakticky nenachází a byl nahrazen mezinárodní zkratkou - HbsAg (povrchový antigen hepatitidy b - povrchový antigen hepatitidy B). Kromě toho můžete najít zkratky hbs antigen nebo jen hbs. Kterákoli z těchto zkratek je přijatelná a může být doplněna záznamem HBV nebo HBV - viru hepatitidy B (virus hepatitidy b).

Povrchový antigen viru hepatitidy B má jednu pozoruhodnou vlastnost, která z něj činí nepostradatelný diagnostický marker - jeho koncentrace v krvi může dosáhnout velmi vysokých hodnot až do poloviny miligramu na mililitr krve. Je to proto, že pouze malá část nových HBsAg, které vznikají při reprodukci viru hepatitidy B, přechází do konstrukce membrán nových virových částic a zbytek volně cirkuluje v krvi. Výsledkem je, že počet částic hbs v krvi může překročit počet virionů stovek tisíckrát.

Tato vlastnost činí australský antigen hlavním markerem při screeningu diagnózy hepatitidy B, která je detekována v krvi již za 4-6 týdnů po infekci. Jako protilátky se povrchový antigen postupně nahradí. Pokud po 6 měsících HBsAg přetrvává, pak to znamená přechod infekce na chronickou formu.

V nedávné době, kdy bylo možné stanovit koncentraci hbs hbv, jeho úloha v diagnostice vzrostla ještě více, protože spoléhání se na hladinu antigenu může odlišit chronickou hepatitidu B (HBV) od zdravého stavu nosiče a monitorovat účinnost léčby.

Základní antigeny

V jádru viru - nukleokapsid - jsou proteiny, které kontrolují reprodukci viru HBcoreAg a HBeAg.

HBcoreAg, který lze také nazvat HBCore-antigen, hbc nebo jádrový antigen, lze nalézt pouze v tkáních jater, přímo v jádrech hepatocytů. Tento antigen není detekován v krvi a nemá žádnou diagnostickou hodnotu.

Struktura viru hepatitidy

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - naopak hraje důležitou roli v diagnostice. HBeAg a HBcoreAg jsou blízcí příbuzní. Mají velkou podobnost struktury a liší se hlavně v prostorové poloze molekul. Na rozdíl od HBcore není HBe součástí nukleokapsidové stěny a volně cirkuluje v krvi.

Úloha HBe v infekčním procesu není dostatečně jasná, nicméně zvláštnosti jejího chování a jejich vztah k průběhu infekčního procesu již byly dostatečně studovány. HBeAg indikuje aktivní reprodukci viru a umožňuje spolehlivě určit fázi chronického CHB - HBeAg-pozitivního nebo HBeAg-negativního.

HBe lze detekovat v krvi již v inkubační době akutního viru hepatitidy B (HBV), zatímco vysoká koncentrace HBeAg po dobu 3 týdnů s největší pravděpodobností indikuje hrozbu chronického procesu. Koncentrace HBe přímo souvisí s obsahem částic Dane (tzv. Částice viru hepatitidy B) - čím vyšší je množství HBe, tím vyšší je koncentrace HBV DNA v krvi.

HBeAg je hlavním ukazatelem infekčnosti onemocnění. Krev HBeAg-pozitivních pacientů je mnohem nákazlivější než HBeAg-negativní. Například u těhotných žen pozitivních na HBe a Hbs, pravděpodobnost přenosu infekce na dítě dosahuje 50%, zatímco pravděpodobnost takové události u HBe-negativních, ale Hb pozitivních matek je 10-30%.

Hbe určuje průběh chronické hepatitidy. HBeAg-pozitivní chronická hepatitida B má mnohem nepříznivější prognózu z hlediska vývoje cirhózy.

To je asi vše, co potřebujete vědět o HBV antigenech, a my přecházíme k druhé skupině markerů hepatitidy B - protilátek.

Co znamená pozitivní nebo negativní výsledek EIA u hepatitidy C?

Aby bylo možné přesně určit typ hepatitidy po předběžné diagnóze, předpovědět průběh nemoci, stanovit stadium jejího vývoje pomocí různých sérologických studií. Nejpřesnější údaje jsou získány po imunoanalýze enzymu. Pomocí ELISA hepatitidy C, diagnostikované v 95% případů. Právě tato analýza umožňuje detekci protilátek antivirového viru hepatitidy C (HCV antivirus) a vyhodnotit nejen stupeň aktivity patologického procesu, ale také úroveň účinnosti antivirové terapie předepsané ošetřujícím lékařem a prováděnou pod jeho kontrolou.

Když je potřeba výzkum a jeho vlastnosti

Hepatitida C je nejnebezpečnější typ této nemoci, protože má dlouhou latentní (latentní) dobu a nebezpečné následky. Aby se předešlo vzniku a vývoji správné a včasné diagnózy, je jednou z nejinformativnějších metod, kterými je rozpoznán imunotest.

Přítomnost HCV infekce v krvi pacienta je možné potvrdit pomocí sérologických markerů a analýza založená na komplexu strukturálních a nestrukturálních virových peptidů umožňuje získat nejúplnější a nejspolehlivější údaje o existenci protilátek. U zdravých lidí chybí protilátky proti viru hepatitidy C v krvi pacienta a jejich detekce indikuje přítomnost patogenu a rozvoj patologického procesu.

V průběhu studie odborníci identifikují protilátky IgM a IgG třídy, které přímo souvisejí se strukturními a nestrukturálními proteiny HCV. Provedení této studie nám umožňuje identifikovat pacienty infikované virem hepatitidy C v raném stádiu onemocnění, přičemž přítomnost celkových protilátek v krvi pacienta indikuje nástup onemocnění nebo předchozí infekci.

Nástup onemocnění je indikován přítomností protilátek třídy IgM a hepatitida typu C může být posuzována pomocí detekovaných protilátek třídy IgG. Stávají se potvrzením rekonvalescence (konečné stadium onemocnění), pro které je charakteristické anatomické a funkční zotavení postižených orgánů.

Včasná ELISA (ELISA) vám umožní identifikovat patologický proces v raném stádiu vývoje, diagnostikovat nemoc s vysokou přesností a zvýšit šance na rychlé zotavení. Test ELISA umožňuje stanovit nejen přítomnost viru, ale také počet specifických celkových antivirových protilátek.

  1. Ženy ve stavu těhotenství při registraci na předporodní klinice.
  2. Pacienti, kteří mají příznaky akutní nebo chronické hepatitidy.
  3. Zdravotníci, kteří jsou neustále v kontaktu s biologickými materiály.
  4. Pacienti s diagnózou AIDS.
  5. Občané závislí na drogách.
  6. Pacienti s alkoholismem a ti, kteří vedou asociální životní styl.

Odvolejte se na test ELISA (enzymový imunotest) a přijímejte důstojníky donucovacích orgánů nebo zaměstnance veřejných služeb. Potřeba ELISA se objeví, pokud máte podezření na porušení funkčnosti jater nebo při přijímání sporných údajů o stavu orgánu po ultrazvuku. Lékař může pacientovi předložit žádost o vyšetření krve ELISA, pokud má podstoupit komplexní chirurgický zákrok. Pokud žena (zejména starší 30 let) plánuje těhotenství, jsou v krevním testu zjištěny zvýšené hodnoty bilirubinu nebo transferázy (ALT, AST).

Specifické anti-virové IgG protilátky byly detekovány již několik let. Jejich koncentrace se postupně snižuje, což potvrzuje pozitivní dynamiku. Co se týče chronické hepatitidy C, v tomto případě se počet celkových protilátek proti HCV nemění. Přesná diagnóza je založena na stanovení hladiny IgM protilátek.

Průběh hepatitidy C závisí na genotypu viru, který způsobil vývoj onemocnění. Je známo 11 moderních odrůd medicíny. V nejobtížnějších situacích je možná infekce několika genotypy viru a jedna z nich je vždy dominantní. Pouze přesná diagnóza pomůže vybrat nejúčinnější léky pro účinnou terapii, zvolit jejich dávkování a stanovit dobu trvání terapeutických zákroků.

Vyhodnocení výsledků výzkumu

Pro stanovení diagnózy podezření na hepatitidu C a získání indikativních informací o množství a kvalitě patogenu se provádí test ELISA (enzym-linked immunosorbent assay), během kterého odborníci obdrží potvrzení o přítomnosti viru v těle a mohou posoudit jeho aktivitu.

Pomocí této studie můžeme vyvodit závěry o:

  • virová zátěž;
  • riziko vzniku chronického procesu;
  • aktivitu reprodukce (replikace) molekuly HCV RNA;
  • trvání patologického procesu;
  • stupně poškození jater.

Rovněž je hodnocena míra rizika chronického onemocnění. Identifikované pomocí ELISA antivirových HCV protilátek ukazují virovou replikaci. Konečné výsledky vyžadují potvrzení s přesnějším výzkumem.

Kvalitativní posouzení výsledku enzymatického imunoanalýzy je vyjádřeno jako pozitivní nebo negativní výsledek. ELISA umožňuje detekci hepatitidy C v raném stadiu vývoje onemocnění, stejně jako v průběhu nemoci v anikterní formě.

Analýza má určité výhody, včetně:

  1. Přesnost kvalitativních a kvantitativních ukazatelů.
  2. Minimální doba studia.
  3. Fázový test.

Enzymový imunotest je jedním z průzkumů, které se vyznačují vysokou přesností, ale navzdory všem výhodám, v některých případech neumožňuje identifikovat patogen přítomný v lidském těle.

Laboratorní asistent vezme pacientovi venózní krev a uloží ji do speciálních nádob. Po určité době jsou antigeny (cizí mikroorganismy) připojeny ke stěnám cévy. Specialista vloží do cévy imunoglobuliny (protilátky) a hledá imunitní odpověď.

Získané výsledky jsou porovnány s údaji speciálně sestavené tabulky. Výsledek je hodnocen jako:

Pozitivní, indikující přítomnost akutní formy onemocnění, pokud je přítomnost protilátek třídy IgA, IgG, IgM stanovena během krevního testu.

Negativní - všechny tři typy protilátek nebyly detekovány, chybí.

Falešně pozitivní - výsledek ELISA je pozitivní, ale nepotvrzený po PCR (polymerázová řetězová reakce).

Pochybné - markery v krvi nejsou detekovány v přítomnosti hepatitidy C. To je možné s příliš časnou diagnózou. Vyžaduje se opakovaná analýza po 2-3 týdnech. Pro přesnou diagnózu proveďte PCR analýzu.

Falešně negativní výsledek analýzy je možný u pacientů užívajících léky, které mají inhibiční účinek na obranný systém těla.

Falešně pozitivní i falešně negativní výsledky analýzy jsou možné z několika důvodů. Především je to minimální virová zátěž ve velmi rané fázi vývoje onemocnění. Neméně důležitý je stav imunitního systému pacienta a individuální vlastnosti jeho těla. Výsledky studie významně ovlivňují podávání léčiv mezi imunosupresivy.

Je nemožné být naprosto přesvědčen o přesnosti výsledku enzymového imunotestu, pokud je pacientka ve stavu těhotenství. Falešné výsledky jsou možné v případech, kdy je analýza prováděna u pacientů s autoimunitními onemocněními, onkologickými onemocněními s benigními tumory.

Další výzkum je prováděn, pokud pacient nedávno trpěl závažným infekčním onemocněním, byl diagnostikován metabolickou poruchou nebo poruchou endokrinního systému. Pokud je složení krve zvýšené hladiny heparinu nebo významně snížené hladiny stopových prvků.

Přesnost analýzy lze zvýšit dodržováním stávajících pravidel pro přípravu na její doručení:

  1. Krev je darována pouze na prázdný žaludek. Poslední jídlo je povoleno nejméně 8-10 hodin před odběrem materiálu.
  2. Ve večerních hodinách, před analýzou, je nutné odmítnout jíst mastné, smažené, kořeněné, uzené produkty a pokrmy.
  3. Nelze mluvit o pití alkoholu.
  4. Je lepší přestat kouřit den před darováním krve.

Enzymově vázaný imunosorbentní test lze provést pouze u pacientů, kteří v současné době netrpí katarální, zánětlivou nebo infekční nemocí a nestěžují si na indispozici.

Porušení uvedených pravidel a požadavků vede k tomu, že výsledek analýzy je hodnocen jako falešně pozitivní. Tato situace se vyvíjí v 15–20% případů. Nicméně, pro úplnou důvěru, lékaři odkazují pacienty na další vyšetření, během kterého potřebují darovat krev pro PCR.

Polymerázová řetězová reakce

Diagnóza není možná pouze na základě výsledků analýzy ELISA. Přítomnost protilátek není důkazem přítomnosti patogenního viru v těle v době studie. Chybné testování může vyvolat nervové zhroucení nebo dokonce akutnější reakci pacienta. Diagnóza založená na výsledcích testu ELISA není přesná. Je nutný další výzkum, jehož výsledky přinesou konečný verdikt lékařů.

Je důležité si uvědomit, že u lidí, kteří v současné době trpí jinými infekčními chorobami, je možný falešně pozitivní výsledek testu, ale jejich imunitní systém nereagoval správně na pronikání patogenů nebo virů do těla.

Diagnostika hepatitidy C umožňuje řadu laboratorních testů, což je zvláštní místo, mezi nimiž je enzymový imunosorbentní test (ELISA). Kvalitativní hodnocení ukazatelů je definováno jako pozitivní nebo negativní výsledek. Absence viru hepatitidy B v krvi pacienta je normou, ale v některých případech po studii odborníci konstatují, že v biologickém materiálu byly zjištěny nevýznamné koncentrace některých fragmentů RNA (kyselina ribonukleová). Identifikujte je pomocí PCR (polymerázová řetězová reakce).

Tento krevní test umožňuje identifikovat původce hepatitidy C v rané fázi vývoje onemocnění a stanovit vysokou diagnózu. Studie je založena na skutečnosti, že viry mají ve své struktuře molekuly DNA (hepatitida B) nebo RNA (hepatitida C).

Během analýzy PCR za použití speciální léčby krevních vzorků pacientů:

  • zvýšení koncentrace molekul nukleové kyseliny;
  • určit jejich typ;
  • určit typ patogenu.

Pokud je v lidské krvi malé množství fragmentů patogenní RNA, všechny budou detekovány pomocí PCR. To umožňuje přesné stanovení diagnózy. Hlavním rozdílem této analýzy od všech ostatních výzkumných metod je 100% přesná diagnostika.

Tato analýza se provádí ve studii krve těhotných žen, které se přihlásily na předporodní kliniku k registraci, s podezřením na hepatitidu C s dlouhým latentním (latentním) obdobím, s obtížemi s přesným stanovením diagnózy pomocí ELISA. PCR je nutná v případech, kdy byl po enzymovém imunoanalýze zjištěn pochybný výsledek.

Virus hepatitidy C v této situaci je v těle pacienta, ale dosud nevyvolala rychlý rozvoj onemocnění. Toto je latentní průběh onemocnění. Analýza se provádí poměrně rychle, protože není třeba pěstovat patogen pomocí živného média, aby se dosáhlo výsledku. Hlavní rozdíl mezi PCR a imunosorbentním testem spojeným s enzymem (ELISA) spočívá v tom, že v této studii neexistuje žádný falešně pozitivní nebo pochybný výsledek.