Hepatitida C je zánět jaterních buněk, ke kterému dochází v důsledku infekce virem HCV (hepatitida C) kontaktem s krví infikované osoby. Genetický kód flavivirového HCV je nesen molekulou RNA (ribonukleové kyseliny) obsaženou ve struktuře viru. Tento život ohrožující jev se vyznačuje utajením v počáteční fázi patologie. Časový interval mezi infekcí a nástupem symptomů (odezva imunitního systému) může být od jednoho měsíce do šesti měsíců. Tato choroba má zpravidla chronickou formu a je obtížné ji vyléčit.
Moderní medicína umožňuje diagnostikovat patologii s malým poškozením jater. Mezi nejběžnější a nejúčinnější diagnostické metody patří analýza PCR. Zvažte v tomto článku, co to je a jaké druhy existují.
Co je to studie
PCR analýza hepatitidy C je laboratorní vyšetření, které detekuje flavirus, genetický materiál kyseliny ribonukleové (RNA). Určuje počet molekul RNA v krvi, kvalitu biologického materiálu, genetický typ viru HCV.
Metoda PCR pro hepatitidu C umožňuje detekci minimálního množství flaviru před tvorbou protilátek, obvykle po infekci.
Studie je často označována jako analýza RNA, protože detekuje částice ribonukleové kyseliny o velikosti 30-60 nm obsažené v flavavirus.
Studie se provádí následujícím způsobem: na prázdný žaludek pacient dává krev ze žíly, která se potom testuje různými metodami:
- PCR v reálném čase se provádí uzavřeným automatickým způsobem a má dolní mez pro detekci RNA viru, rovnou 15 IU / ml;
- COBAS AMPLICOR s citlivostí 50-100 IU / ml.
Čím vyšší je práh citlivosti diagnostické techniky, tím větší jsou šance na nalezení nejnižšího obsahu viru v biologickém materiálu, který je předmětem zkoumání.
Jaké typy analýz používají
Analýza, která byla úspěšně používána několik desetiletí, se nazývá PCR hepatitida a může být detekována poměrně snadno a rychle. V medicíně existují dvě metody reakce, které se od sebe zásadně liší:
- kvalitativní metoda odhaluje přítomnost genetického zdroje specifického viru v biologickém materiálu;
- kvantitativní analýza měří počet genetických látek, které umožňují určit stadium patologie nebo zhodnotit účinnost terapeutického průběhu;
- genotypování určuje typ viru přítomného v těle.
Obecně platí, že krevní test pomáhá určit povahu virémie a genetického typu patogenu. Výzkum se zpravidla provádí 1krát v závislosti na stupni citlivosti diagnostického systému. V případě potřeby se provede opakované testování za použití ultrazvukového činidla.
Vysoce kvalitní PCR
Co je vysoce kvalitní PCR RNA pro hepatitidu C? Podstata reakce spočívá v přítomnosti RNA sekvence hepatitidy a reakce je možná pouze v přítomnosti virových proteinů s podobnou etymologií v testu ELISA. V procesu porovnávání se zjistí zatížení a možné poškození oblasti jater.
Charakteristickým rysem této metody je schopnost detekovat i přítomnost samostatného genu.
Je třeba poznamenat, že po obdržení výsledků testů PCR a ELISA pacient vyžaduje vhodnou léčbu bez ohledu na to, jaký byl konečný výsledek imunotestu. Pozitivní indikuje infekci a PCR negativní indikuje snížený počet virových částic vzhledem k úrovni citlivosti.
Existuje několik stavů, které ovlivňují produkci negativní PCR a ELISA:
- nedostatek vhodných podmínek pro sběr materiálu;
- výsledná analýza obsahuje kontaminaci;
- v případě časné injekce heparinu pacientovi.
Pacient nemusí dodržovat určitá pravidla pro odběr krve pro analýzu PCR, v tomto případě závisí kvalita této analýzy na tom, zda lékař provede proceduru. Schopnost prokázat přítomnost onemocnění (zejména v akutní formě) se objeví během několika týdnů po infekci.
Kvantitativní analýza
Kvantitativní test se doporučuje pro detekci virové zátěže bezprostředně před tvorbou další terapie a reakce těla. Proces odběru vzorků krve se provádí podobným způsobem jako u vysoce kvalitních PCR a ELISA, jedinou podmínkou je absence možnosti kouření pacienta před zákrokem.
S ohledem na vlastnosti získané studiem dat je zvýšená zátěž charakterizována indikátory od 800000 IU / ml, nízká - 400000 IU / ml. Přítomnost viru v těle pacienta je indikována PCR pro hepatitidu není negativní kvalitativní test.
Tento druh výzkumu umožňuje určit, jak nebezpečný je pacient vůči lidem kolem něj. Například identifikace vysoké hladiny indikuje zvýšenou infekčnost pacienta. Výsledky analýzy navíc pomáhají formulovat další nejefektivnější léčbu a určit, nakolik je stávající terapie považována za účinnou.
Rychlá negativní reakce testů ukazuje úspěch zvolené techniky a pomalá naznačuje potřebu úpravy a použití vícefázové léčby.
Proces provádění analýzy závisí na konkrétním dni průběhu onemocnění. První stanovení se provede první den po přijetí pacienta do nemocnice, poté se postup opakuje po 4, 12 a 24 týdnech po užití léků.
Kvantitativní analýza tedy ukazuje, která léčba je nejúčinnější, doba trvání dostupné terapie a nebezpečí pacienta ve vztahu k ostatním lidem.
Genotypizace
Při studiu materiálové analýzy je důležité určit přesnost genotypu viru, ke kterému dochází. V současné době existuje 11 druhů viru hepatitidy C, které zase zahrnují určité poddruhy.
Všechny tyto druhy reagují odlišně na různé druhy léčby, přičemž jednotlivé odrůdy jsou naprosto odolné vůči mnoha léčivům.
Genotyp umožňuje stanovit a ukázat stav jater. Není neobvyklé, že výsledky nejsou ve výsledcích „typizované“, což znamená, že tento testový systém nedetekuje virus v krvi pacienta. To lze zjistit, pokud určitý genotyp neodpovídá této zóně. V takové situaci je analýza prováděna opakovaně a pro studium materiálu je použit citlivější systém.
Ultra citlivá metoda
V některých případech je nutná ultrazvuková metoda, kdy diagnóza hepatitidy nemůže být prováděna jinými metodami, a kdy provedení analýzy určí ošetřující lékař:
- jestliže máte podezření na přítomnost viru hepatitidy C u pacientů se skrytou rozmanitostí onemocnění;
- přítomnost protilátek proti viru hepatitidy C, která nebyla potvrzena PCR diagnostikou;
- za účelem stanovení kvality účinnosti zvoleného způsobu léčby a potvrzení eliminace onemocnění.
Citlivost této metody je mnohem vyšší než u běžně používaných metod, avšak tato metoda nevylučuje získání falešných výsledků, pozitivních i negativních. V takové situaci je důležité kontrolovat kvalitu postupu a možnost kontaminace samotného materiálu.
Vysvětlení PCR analýzy
Dekódování analýzy je prováděno na základě předložených materiálů, zatímco výsledky laboratorního výzkumu zahrnují určité údaje popsané výše.
Transkript může zahrnovat pozitivní PCR polymerázovou řetězovou reakci a negativní test ELISA v testu, což znamená, že pacient nemá v krvi žádné známky hepatitidy C, ale v minulosti přenesl akutní formu onemocnění. Zpravidla se při diagnostice uchylují odborníci k použití testovacích ukazatelů PCR.
Shrnutím všech výše uvedených skutečností lze konstatovat, že v průběhu analýzy je důležité dodržovat všechna pravidla a doporučení tak, aby získané výsledky byly co nejpřesnější, a na základě získaných dat je možné určit účinnost použité terapie a další šanci na úplné uzdravení.
Kvalitativní analýza hepatitidy C
8. března 2017, 12:29 Odborné články: Nová Vladislavovna Izvchikova 0 10,547
Kvalitativní analýza polymerázové řetězové reakce - PCR pro hepatitidu C určuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v těle. V laboratorních podmínkách se zkoumá struktura RNA, která bude zahrnovat virus. V případě detekce viru C je nutné podstoupit léčbu, protože zanedbaný stav jater bude mít závažné následky. Vysoce kvalitní PCR se provádí po zotavení, aby se potvrdila nepřítomnost protilátek. Jmenován a pro rutinní kontrolu. Při nízké koncentraci původce v krvi nemusí PCR (kvalitativní) nic detekovat, protože diagnostický systém má své vlastní prahy citlivosti. V případě počátečního stadia onemocnění nebo mírné formy se PCR provádí ultradiagnostikou na ultracitlivém zařízení.
Co je to RNA virus?
Termín RNA viru hepatitidy C (nebo RNA viru hepatitidy C) je samotné onemocnění jater. Virus C se váže na zdravou buňku těla tím, že proniká dovnitř. V průběhu času, se šíří po celém těle, je nutné se dostat do krve. V důsledku toho patogen proniká do jater, fúzuje se s buňkami a tvrdě pracuje. Jaterní buňky (hepatocyty) pracují pod svým vlivem, procházejí změnami a odumírají. Čím déle je virus C v játrech, tím větší je počet buněk. Postupem času se vyvíjejí nebezpečná onemocnění vedoucí k maligní degeneraci a smrti.
Infekce jater tímto typem viru se nemusí projevovat externě. Po mnoho let nebo desetiletí se infikovaný člověk cítí zcela zdravý a pouze náhodné vyšetření nejčastěji odhaluje patologii. Při darování krve pro hepatitidu se zkoumá část řetězce RNA (ribonukleová kyselina), který je součástí lidského genu (DNA). Výsledky laboratorních testů by neměly být použity pro samoléčbu, protože se jedná pouze o indikátor. Přesný obraz a další diagnóza jsou lépe určeny lékařem.
Po dokončení: indikace pro výzkum
Při potvrzení HCV se provádí PCR analýza (polymerázová řetězová reakce). Studie PCR pomáhají nalézt kauzativní agens ve struktuře RNA a předepisují účinnou terapii. Jmenován v následujících případech:
- detekce příznaků zánětu jater;
- screeningové studie prevence;
- zkoumání osob v kontaktu;
- diagnostika hepatitidy smíšeného původu (stanovení hlavního patogenu);
- stanovení úrovně reprodukční aktivity viru v chronické formě;
- cirhóza jater;
- stanovení předepsané léčby.
K dispozici je kvalitativní i kvantitativní analýza PCR. Kvantitativní PCR ukazuje procento RNA s nosiči viru v krvi a kvalitativní indikuje virovou přítomnost nebo nepřítomnost. Pozitivní indikátor kvality (přítomnost RNA hepatitidy C) také vyžaduje kvantitativní výzkum. Vysoká úroveň koncentrace původce hepatitidy C je spojena s rizikem jejího přenosu, tj. Infekce jiných. Nízká čísla jsou lépe léčitelná. Množství virů RNA v krvi nesouvisí s intenzitou onemocnění. PCR analýza se také provádí v případě terapie interferonem, aby se předepsalo trvání a složitost léčebného cyklu.
Vlastnosti vysoce kvalitní PCR analýzy pro hepatitidu C
Kvalitativní analýza je přiřazena ukazateli polymerázové řetězové reakce pro všechny pacienty, kteří mají ve své krvi protilátky proti hepatitidě C. Ti, kteří byli nemocní a zotaveni, musí znovu podstoupit test. Doporučuje se provést analýzu hepatitidy B, pak v případě pozitivního závěru a hepatitidy D. Také kvalitativně analyzovaná reakce by měla být prováděna ve spojení s dalšími krevními testy. Analýzy ukazují úplný obraz šíření viru.
Z výsledků testu bude viditelný nebo negativní pouze pozitivní test na hepatitidu C, tj. Přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pokud je výstup "detekován", pak je virus aktivní a zůstává aktivní. Označení "nedetekováno" označuje nepřítomnost viru nebo jeho malého množství. S tímto ukazatelem je třeba mít na paměti, že analytická citlivost diagnostických systémů je odlišná a že RNA hepatitida C může být stále v krvi, ale v analýze se neprojevuje.
Zvláště citlivá metoda PCR odhaluje ultra hepatitidu C i v malých množstvích. Použije se fluorescenční hybridizační studie, která je mnohonásobně vyšší než standardní PCR systémy. Metoda se používá v několika případech:
- podezření na skryté formy hepatitidy C;
- PCR diagnostika nepotvrdila patogen, ale existují protilátky;
- v případě využití;
- odhalit časnou infekci.
Dekódovací analýza
PCR dekódování HCV ovlivňuje konečné rozhodnutí při stanovení diagnózy, zejména pomocí ultrametodové metody. Hlavní nevýhodou této studie je přísné dodržování sterilních podmínek pro vzorek a materiály. Mírná odchylka někdy ukazuje nepřesné analytické závěry, komplikuje diagnózu a následnou léčbu. Analýza PCR pro stanovení hepatitidy RNA ne vždy s jistotou ukazuje obraz onemocnění, někdy jsou přípustné nepřesnosti, a to v obou směrech.
Při diagnostice viru hepatitidy se doporučuje provést komplexní vyšetření.
Norma ukazatelů
Absence JgM protilátek proti virové hepatitidě C ve výsledcích studie je považována za normu v analýze polymerázové řetězové reakce. Současně nálezy sérologické analýzy ukazují na přítomnost protilátek proti viru C, což je také v normálním rozmezí. Kvalitativní definice neukazuje intenzitu onemocnění, pouze odhaluje původce hepatitidy C v RNA. Tato analýza se po zpracování opakuje, aby se potvrdilo skutečné zotavení.
Odchylky
Pokud jsou přítomny JgM protilátky proti HCV RNA, znamená to, že se vyvíjí infekce. Onemocnění zároveň probíhá akutně nebo chronicky, projevuje se v různých fázích. Pokud je zaznamenán pokles počtu protilátek, analýza ukáže, že výsledky léčby byly dosaženy během zotavení. Existují extrémně vzácné případy falešně pozitivních nálezů v diagnostice. Oni jsou nalezeni u žen během těhotenství au lidí s jinými infekčními chorobami.
Diagnóza s PCR pro hepatitidu C
Ne každý ví, proč používají diagnostickou metodu PCR pro hepatitidu C. Jednou z nejčastějších skupin onemocnění jsou infekční onemocnění gastrointestinálního traktu. Nejčastěji jsou postiženy žaludek (vředy), střeva (kolitida, enteritida) a játra (hepatitida).
Ze všech výše uvedených orgánů je největší zátěž na játra. Úloha jater v těle je mimořádně důležitá:
- Téměř všechny metabolické reakce probíhají v játrech (zde se tvoří všechny typy životně důležitých složek, které umožňují tělu plně fungovat).
- Játra jsou hlavním detoxikačním orgánem. S jeho pomocí (zejména žlučí) se odstraní mnoho substrátů, které mohou způsobit intoxikaci a vést k vážným následkům.
Bohužel mnoho lidí nesleduje jejich zdraví, proto játra začínají trpět. Hepatitida různých etiologií (virová, toxická) se obvykle vyvíjí.
Definice hepatitidy
Virová hepatitida zaujímá důležité místo mezi onemocněním jater. Závažnost průběhu onemocnění, složitost léčby je řadí mezi patologii jiné povahy tohoto orgánu.
Všechny hepatitidy jsou rozděleny na akutní a chronické. Hepatitida A a B jsou klasifikovány jako akutní, mezi chronickou hepatitidou C přichází první.
Toto onemocnění je způsobeno virem hepatitidy C. Charakteristickým rysem je, že onemocnění může trvat dlouho bez jakýchkoli klinických projevů.
Přenáší se hlavně krví. S proudem krve vstupuje virus do jater, kde se začíná množit ve svých buňkách. V důsledku akumulace virionů dochází k destrukci infikovaného hepatocytu. V reakci na to začínají být produkovány protilátky, které začínají napadat zbytky hepatocytů. Z tohoto důvodu se v průběhu času vyvíjí bazén proti jaterním buňkám, což zhoršuje průběh onemocnění.
Vzhledem k tomu, že onemocnění je mírné asymptomatické nebo asymptomatické, a klinické příznaky se objevují pouze v případě, že jsou buňky významně postiženy, vyžaduje toto onemocnění vytvoření diagnostických metod pro detekci jeho přítomnosti a přijetí vhodných opatření.
Diagnostika hepatitidy C: kvalitativní a kvantitativní analýzy
V současné době se pro diagnostiku hepatitidy C používají takové metody, jako je biopsie jater a imunogram.
Umožňují přímo určit přítomnost infikovaných hepatocytů (jaterní biopsie) nebo specifických protilátek proti postiženým buňkám (imunogram). Existuje však metoda, která vám umožní spolehlivě určit přítomnost samotného viru. Toto je PCR - polymerázová řetězová reakce.
Podstata této metody spočívá v tom, že za určitých podmínek dochází k produkci řetězců RNA. To je způsobeno skutečností, že v krvi nebo v biopsii se jedná o fragmenty virové částice. Při jejich spojení s některými molekulami v médiu dochází k syntéze řetězců komplementárních k virové RNA. Při jejich následné analýze a porovnání se známou nukleotidovou sekvencí viru hepatitidy C je možné určit, zda je virus přítomen v těle a zda je přítomno poškození jater.
PCR se provádí po detekci specifických protilátek proti viru hepatitidy v krvi. Po provedení testu se výsledek „RNA“ detekuje nebo „nezjistí“. Příležitostně může říci „není dost materiálu“ - v tomto případě je nutné opakované testování na hepatitidu C.
Pokud je počet virových částic menší než požadované minimální množství, můžeme říci, že neexistuje žádná hepatitida a minimální množství genetického materiálu by mohlo být „zmateno“ v důsledku mimikry genetického materiálu nebo některých nukleotidových sekvencí, které by se mohly shodovat s virem.
- S PCR lze pozorovat negativní výsledek, když jsou v krvi skutečně virové částice, ale jsou tak malé (v poslední době se vyskytla infekce nebo analýza předcházela dlouhodobá a intenzivní antivirová terapie), že testovací systém nedokázal určit svou koncentraci normálně. RNA - "nedetekováno".
- Pokud má PCR pozitivní výsledek, pak je v krvi tolik virových částic, že jejich počet překračuje dolní práh citlivosti testovacího systému. V tomto případě existuje vysoké riziko vzniku infekčního procesu (nebo je již v poměrně pokročilém stadiu). Obvykle je velké množství viru již indikací pro léčbu a následnou transplantaci jater.
Někdy může být test falešně pozitivní nebo falešně negativní.
Falešně negativní výsledek PCR hepatitidy je pozorován v případě, kdy jsou některé složky přítomny v reakčním médiu, které inhibuje tvorbu kopií virové částice. Z tohoto důvodu není možné získat pravdivý obraz o stavu krve, který přispívá k průchodu viru a progresi onemocnění. Přítomnost heparinu v krvi může také ovlivnit reakci (snížením relativní viskozity krve). Nesprávný výklad analýzy je možný i v případě, že nebyly splněny podmínky přepravy a skladování zkoumaného materiálu.
Falešně pozitivní výsledky, když je diagnostikována hepatitida C, PCR nejčastěji vyplývá z kontaminace zkumavky nebo pracovního prostředí. Kromě toho lze pozorovat pozitivní výsledky s přítomností virů hepatitidy jiných skupin (v důsledku křížové reakce).
Kvalitativní analýza PCR pro detekci hepatitidy C
Přítomnost velkého počtu kryoglobulinů v krvi také přímo ovlivňuje chování PCR. Z tohoto důvodu je nutné před testováním na hepatitidu C určit jejich koncentraci v krvi, aby se předem zjistilo zkreslení výsledku a zabránilo se mu.
Po těchto testech je jasné, zda jsou v krvi virové částice. Při jejich stanovení se doporučuje okamžitě zahájit antivirovou terapii, aby se zpomalil průběh procesu. Na rozdíl od hepatitidy B neexistuje kompletní léčba hepatitidy C; nemoc přechází pouze do latentní fáze a začíná postupovat pomaleji. Poškození jater je nevyhnutelné. V poslední fázi procesu, kdy se játra již nedokáží vyrovnat s jeho funkcí, může vyžadovat jeho transplantaci.
Léčba se provádí hlavně dvěma léky - interferonem a ribavirinem.
Dokázali svou účinnost při zpomalení procesu porážky hepatocytů. Podél cesty, infuzní terapie je nutně předepsán k usnadnění práce jater.
Všichni pacienti, u kterých došlo ke zvýšení počtu virových částic v krvi, jsou nutně registrováni u hepatologa. Několikrát ročně se doporučuje, aby podstoupili preventivní vyšetření k určení postupu procesu a včasného odhalení indikací pro transplantaci. Navíc je možné použít hepatoprotektory, i když se názory lékařů poněkud liší. Někteří se domnívají, že tyto léky vám umožní pozastavit proces a chránit stále nenarušené hepatocyty; jiní jsou přesvědčeni, že nemá smysl je brát a měla by být prováděna intenzivní antivirová terapie.
Hepatitida C tak patří do kategorie nemocí, jejichž identifikace představuje určité obtíže. Zlepšení diagnostických metod a včasná preventivní vyšetření sníží výskyt tohoto onemocnění. Důležitá je také prevence tohoto onemocnění. Člověk by se měl opatrně vyhnout kontaktu s krví, odmítnout užívat léky, až poté bude tato nemoc vymýcena. Hlavní v prevenci a léčbě je vědomý postoj pacienta k jejich zdraví.
Provedení PCR analýzy pro hepatitidu C a dekódování výsledků
Analýza PCR hepatitidy C je studie, jejímž hlavním účelem je identifikovat genetický materiál původce původce. Analýza odhalila původce onemocnění pomocí polymerázové řetězové reakce. Tato diagnóza má vysoký stupeň přesnosti, specificity pro detekci nepřítomnosti nebo přítomnosti virové infekce.
Podstata diagnózy
Za účelem provedení PCR analýzy pro stanovení viru hepatitidy C od pacienta byla odebrána žilní krev, která potenciálně obsahuje RNA (ribonukleová kyselina) HCV požadovaného viru.
Test PCR na hepatitidu C zahrnuje postup pro přidání krevních částic pacienta:
- primery (krátké uměle syntetizované oblasti nezbytného genu);
- speciální enzym (RNA polymeráza).
Po odběru vzorků je biologický materiál odeslán k výzkumu do laboratoře. Jedna část krve je potřebná pro přímou analýzu PCR, druhá je odeslána pro testování pomocí ELISA. Enzym je schopen v krátké době zvýšit počet genetického materiálu viru patogenu. Ve speciálním zařízení se provádí několik cyklů tepelných a chladicích procesů. V konečné fázi je získaný materiál srovnáván s geny viru a je učiněn závěr o přítomnosti nebo nepřítomnosti patologie v těle pacienta.
Podstata a provedení PCR analýzy v laboratoři. Natočeno SiberianMedicalLaboratory.
Typy výzkumu
Existují 3 typy diagnostiky, které umožňují zjistit přítomnost viru hepatitidy C v lidském těle:
- genotypování;
- kvality;
- kvantitativní.
Kvalitativní metoda
Diagnostika hepatitidy C s kvalitativní metodou je použitelná u pacientů, u kterých jsou protilátky proti viru detekovány v krevním testu. V případě přítomnosti akutní fáze HCV RNA mohou taková diagnostická opatření stanovit přítomnost onemocnění během 1-2 týdnů po infekci. Během této doby nemusí být protilátky proti hepatitidě C dosud vyvinuty.
Kvantitativní metoda
Ke stanovení koncentrace viru ve vzorcích krve se používá kvantitativní diagnostická metoda. Takový test virémie (stupeň koncentrace) umožňuje přesně určit počet jednotek virové RNA. Konečný výsledek je vyjádřen v odpovídajícím objemu. Pokud hovoříme o kvantitativní analýze, pak jsou ukazatele měřeny v 1 ml (1 m 3 Cm).
Parametr virové zátěže znamená úroveň infekčnosti onemocnění, tj. Odráží stupeň „infekčnosti“ pacienta. V praxi to znamená, že čím vyšší je koncentrace viru v krvi, tím větší je pravděpodobnost, že pacient infikuje ostatní hepatitidou C. Metoda kvantitativního výzkumu také umožňuje stanovit kvalitu a účinnost léčby.
Genotypizace
Genotypizace odhaluje mutace původce onemocnění. Před předepsáním léčebného plánu je stanoven genotyp viru: závisí na něm kvalita a trvání léčby. Například při léčbě onemocnění typu I je účinnost 60%, v případě typu II, typu III - přibližně 80%.
Výhody analýzy hepatitidy PCR
Mezi hlavní výhody postupu patří:
- Možnost včasné diagnózy. PCR analýza je schopna detekovat přítomnost viru v časných stadiích infekce.
- Nízké výsledky chyb. Studovaný biologický zdroj umožňuje diagnostikovat část genetického materiálu, která je charakteristická pouze pro jeden typ virové infekce. Tato okolnost umožňuje zabránit falešným diagnostickým výsledkům.
- Vysoká citlivost. PCR analýza je schopna detekovat RNA viru v malých množstvích, což také umožňuje sledovat latentní infekce v čase.
Indikace pro
Testování na PCR na hepatitidu C je nezbytné, pokud je k dispozici:
- kontakt s nemocnými, což by mohlo vést k infekci;
- příznaky jaterní cirhózy (zvětšení sleziny, netypické změny velikosti jater, detekce žilního plexu na břiše pod kůží);
- pozitivní výsledky testu ELISA;
- zvýšená aktivita AST a ALT (projevuje se biochemickou analýzou krve);
- nutnost kontrolovat provádění antivirové terapie;
- počáteční fáze léčby pro potřebu stanovení virové zátěže;
- provedení závěrečné fáze terapie k vyloučení možných opakování;
- pacient má hepatitidu B, aby vyloučil vznik smíšeného poškození jater.
Jak se připravit na dárcovství krve pro výzkum PCR
Příprava pro PCR analýzu zahrnuje následující doporučení:
- krev se odebírá ráno;
- analýza se provádí na prázdném žaludku, takže je vhodné si vzít přestávku mezi posledním příjmem potravy 8 až 10 hodin;
- několik dní před diagnózou by měly být vyloučeny mastné, kořeněné a smažené potraviny, alkoholické nápoje a kouření;
- jeden den před analýzou je třeba upustit od těžké fyzické námahy, vyloučit třídy v posilovně nebo bazénu.
Výsledky analýzy: normy a odchylky
Samotná analýza není dlouhodobá a vysoce kvalifikovaný specialista na hepatolog nebo infekční onemocnění dešifruje výsledky PCR pro hepatitidu C. Na základě výsledků analýzy je pacient diagnostikován.
Aby se výsledky průzkumu správně dešifrovaly, jsou zohledněny následující ukazatele:
- biochemická analýza krve;
- ultrazvuková data;
- výsledky biopsie.
Interpretace kvantitativní analýzy
Při získávání výsledků kvantitativní analýzy PCR se berou v úvahu následující ukazatele:
Metoda PCR pro detekci hepatitidy C
PCR je polymerázová řetězová reakce, která se používá k určení přítomnosti hepatitidy C v séru a může být pozitivní i negativní.
Výhody metody PCR
Tato diagnostická metoda má následující výhody:
- Metoda PCR umožňuje stanovit následující výsledky:
- přítomnost RNA viru;
- stupeň záření;
- původní genetické informace;
- jedinečnost a jedinečnost genetických dat.
- Můžete použít jakýkoli nezbytný klinický materiál:
- krev;
- plazma;
- moč;
- tělní tekutiny a výkaly;
- sputum a další.
- Umožňuje určit v krvi více než jeden mikroorganismus najednou, na rozdíl od jiných vzorků.
- Získání výsledků do 24 hodin.
- Zjednodušené metody skladování a transportní analýzy, patogeny jsou stanoveny i v mrtvém prostředí.
- Jedinečnost PCR umožňuje identifikovat určité mikroorganismy, které nejsou přístupné žádnému dalšímu vzorku.
- Vysoký stupeň citlivosti činidel, test je nejpřesnější svého druhu.
Vlastnosti kvalitativní analýzy PCR
Pro stanovení přítomnosti viru v krvi a získání negativního nebo pozitivního výsledku se provádí kvalitativní test.
Indikace tohoto typu diagnózy je detekce protilátek proti hepatitidě C v těle pacienta.
Možné výsledky:
- zjištěno (pozitivní);
- není detekován (negativní).
Test kvality není vhodný pro pacienty s velmi nízkým obsahem viru v krvi, takže má určitou citlivost.
Výsledek "detekován"
Detekce viru hepatitidy C může být několik týdnů po infekci těla, dokonce i v nepřítomnosti protilátek proti tomuto patogenu. Tento výsledek ukazuje přítomnost fragmentu RNA charakteristického pro hepatitidu C v těle a v krevní skupině.
Pacient je považován za infikovaného tímto virem a podstupuje další šíření patogenních buněk v těle.
Výsledek „nebyl detekován“
Tato možnost naznačuje, že ve vzorku studovaného biologického materiálu nejsou žádné fragmenty RNA specifické pro hepatitidu C. To je negativní výsledek.
Citlivost testu neodhaluje nízký obsah fragmentů RNA, takže „nedetekovaný“ výsledek není vždy věrohodný.
Vlastnosti interpretace výsledků
Hlavním rysem interpretace výsledků je prahová citlivost metody PCR.
Závisí na následujících ukazatelích:
- přesnost studie;
- typ a kvalita použitého zařízení.
Je třeba poznamenat, že citlivost se může pohybovat mezi 10-500 IU / ml. Z toho vyplývá, že pokud je virus přítomen v těle sledovaného pacienta v koncentraci nižší než 10 IU / ml, test ukáže výsledek „nedetekován“. To však neznamená, že by patogen zcela chyběl.
Varianty diagnostických systémů
V současné době existují následující možnosti diagnostických systémů:
- Je-li pacientům podstupujícím antivirovou léčbu odebrána krev, měly by být použity diagnostické systémy s citlivostí nejméně 50 IU / ml. Pro tento účel se používají následující analyzátory:
- Cobas Ampicolor HCV-Test;
- RealBest HCV RNA.
- Pro definitivní diagnózu „hepatitidy C“ je nutné detekovat RNA virus ve třech různých vzorcích biologického materiálu. Tato doporučení vypracovala Světová zdravotnická organizace. Pokud je výsledek třikrát negativní, není diagnóza potvrzena.
- V současné době existuje vedle metody PCR také přesnější test nazvaný TMA (transkripční amplifikační metoda). Jeho práh citlivosti je mnohem vyšší než u jiných diagnostických metod.
Rozsah detekovaných virových modifikací
V této fázi vývoje genetiky je známo několik typů a variant modifikace viru.
Laboratorní diagnostika u nás s absolutní přesností může stanovit následující genotypy:
Vlastnosti kvantitativní analýzy PCR
Kvantitativní analýza je definicí viru hepatitidy C v lidském těle. Během studie se stanoví RNA a virová zátěž ve výchozím materiálu pomocí PCR. Jinak můžeme říci, že test vám umožní určit, kolik virových buněk je v biologické tekutině. Pro tento typ studie se používá pouze žilní krev. Neexistuje žádný specifický test.
Kvantitativní analýza umožňuje sledovat již zahájenou léčbu a vyhodnotit její účinnost. Pro vyhodnocení se před zahájením a během terapeutických zákroků odeberou údaje ze zkoušek. Pomocí získaných výsledků je možné předpovědět průběh onemocnění.
S úspěchem zvoleného způsobu léčby po 3 měsících by se množství RNA mělo několikrát snižovat. Podle doporučení se kvantitativní analýza provádí po jednom, potom po třech a šesti měsících. Poslední výsledek s úspěchem léčby by měl být negativní.
Vyhodnocení výsledků kvantitativního testu PCR
V naší zemi existují 2 možné možnosti posouzení výsledku kvantitativního testu PCR:
- počet kopií biologické tekutiny na mililitr;
- počet mezinárodních jednotek na mililitr.
Pro získání mezinárodních jednotek se počet kopií dělí čtyřmi.
- vysoká s PCR nad 800 000 IU / ml;
- nízká s PCR pod 400 000 IU / ml.
Výsledek kvantitativního testu poskytuje 2 možnosti:
- "Pod měřicím rozsahem";
- "Nenalezeno" (negativní).
Hodnocení: „pod měřicím rozsahem“
Takový závěr je učiněn, když kvantitativní RNA test nezjistil původce hepatitidy C v materiálu buněčného zdroje, ale virus je stále přítomen v krvi. Spolehlivost analýzy je potvrzena kvalitativní metodou, protože práh citlivosti kvantitativního testu nemusí detekovat malé hodnoty a koncentrace patogenu.
Hodnocení: "nedetekováno"
Takový závěr je učiněn, když RNA virů hepatitidy C nebyla během diagnostiky zjištěna ve zdrojovém materiálu, což je negativní výsledek.
Interpretace výsledků analýzy kvantitativního testu PCR
Pomocí indikátoru virové zátěže určete:
- stupeň zanedbání nemoci;
- jak infekční je pacient;
- účinnost antivirové terapie.
Čím vyšší je míra viru hepatitidy C v těle, tím nebezpečnější je pro ostatní lidi a progresivnější je jeho nemoc.
Hepatitida C PCR je důležitá diagnostická metoda, zejména během terapeutických zákroků. Díky získaným negativním nebo pozitivním výsledkům je možné vyhodnotit jejich účinnost, zcela vyléčit pacienta nebo zkrátit dobu léčby.
PCR analýza pro hepatitidu C
Pro diagnózu "chronické virové hepatitidy C (CVHS)" vyžaduje komplexní vyšetření osoby, která zahrnuje klinické, laboratorní a instrumentální studie. Z hlediska diagnostiky pro správnou diagnózu je důležitá metoda PCR - polymerázová řetězová reakce.
Co tato analýza ukazuje a proč je potřeba?
Tato laboratorní metoda detekuje RNA viru hepatitidy C v lidské krvi. Spolu s testem ELISA (ELISA) na protilátky proti viru se používá PCR pro stanovení diagnózy CVHC a jeho genotypu patogenu. Tento výzkum je jednou z nejnovějších metod laboratorní diagnostiky. Jeho spolehlivost na CVHS přesahuje 97%, což je považováno za velmi dobrý ukazatel pro výzkum.
Existují tři PCR krevní testy na CVHS: kvalitativní, kvantitativní a virové genotypování. První studie (kvalitativní analýza) viru ji detekuje v krvi, a proto se používá pouze pro diagnózu.
Druhá (kvantitativní) studie určuje míru virové zátěže na těle, proto se používá ke sledování účinnosti léčby.
Třetí PCR (genotypizace) objasňuje diagnózu a stanovuje genotyp viru, což je velmi důležité pro určení správné antivirové léčby.
Podstatou techniky polymerázové řetězové reakce je použití enzymů, které násobí genetický materiál patogenu v biomateriálu. V procesu takové replikace se trubice s krví několikrát zahřívá a ochladí na teplotu potřebnou pro urychlení enzymatické reakce. V důsledku těchto manipulací se množství virového genomu mnohokrát zvyšuje, což umožňuje jeho detekci i při minimálním množství.
PCR diagnostika má mnoho výhod oproti jiným laboratorním testům:
- vysoká citlivost - 97-98%;
- garantovaná analytická specificita (odhaluje přesně patogen, který chcete najít, a ne jeho příbuzný kmen);
- rychlost vedení (trvá déle než 2 dny, než se dospěje k závěru).
Tři typy PCR testů
Vysoce kvalitní PCR analýza je přiřazena všem pacientům, u kterých analýza ELISA detekovala protilátky proti viru HVGS. Po provedení vysoce kvalitní PCR mohou být získány dvě možnosti odpovědi: "RNA je detekována" nebo "RNA není detekována." Pro detekci minimálního množství viru v krvi jsou potřebné testovací systémy s citlivostí nejméně 50 IU / ml. Pokud je koncentrace viru v krvi pacienta nižší, než může diagnostik určit, může být výsledek studie falešně negativní. Aby se předešlo takové diagnostické chybě, měly by být laboratoře provádějící diagnostiku PCR vybaveny vysoce citlivými testovacími systémy. V laboratoři "Invitro" se používají například testy s citlivostí 15 IU / ml. Laboratorní pracovníci jsou povinni poskytnout pacientům a lékařům informace o citlivosti testů na jejich první žádost.
Kvantitativní analýza PCR určuje stupeň virémie, tj. Koncentraci patogenu v krvi, virovou zátěž. Výsledek této studie, na rozdíl od vysoce kvalitní PCR, je vyjádřen v počtech, například 2 × 10 * 6 IU / ml, což znamená 2 miliony mezinárodních jednotek v 1 ml krve. Některé laboratoře používají jiný indikátor - počet kopií / ml. Tyto dva ukazatele lze snadno převést: 1 mezinárodní jednotka se rovná 4 kopiím RNA. 2 × 10 x 6 IU / ml bude tedy znamenat, že 8 x 10 x 6 kopií virové RNA v 1 ml, tj. 8 milionů kopií v 1 ml krve.
Genotypizace je definicí jednoho ze šesti genotypů viru. Klinický obraz, rychlost vývoje komplikací jater a prognóza budoucího života pacienta závisí na genotypu původce. Genotyp viru je velmi důležitý již ve stadiu diagnózy, protože kombinace léčiv a doba trvání terapeutického kurzu, který má být pacientovi přiřazen, závisí na jeho správném stanovení.
Nicméně i tento zdánlivě „dokonalý“ laboratorní výzkum má své nevýhody:
- studie replikuje genetický materiál všech patogenů, dokonce i neživých, které mohou zkreslit výsledek. Aby bylo možné sledovat účinnost pomocí PCR, provádí se re-analýza nejdříve 2 měsíce po předchozím, takže mrtvé viry mohou „opustit“ organismus pacienta;
- část virového genomu, která je určena testovacími systémy, může být teoreticky přítomna v jiných virech nebo mikroorganismech, takže existuje možnost falešně pozitivní reakce;
- viry rychle mutují. Někdy je rychlost a rozsah mutace viru tak vysoká, že testovací systém přestane zachytávat svůj genom. V důsledku toho je možný falešně negativní výsledek.
Pro vyrovnání těchto nedostatků výrobci laboratorních testovacích systémů pro diagnostiku PCR neustále provádějí testy, včetně zkřížených reakcí a citlivosti na konkrétní genotyp viru.
Jak provést PCR test na hepatitidu C?
Aby byl závěr PCR vyšetření spolehlivý, je nutné striktně dodržovat pravidla přípravy na jeho provádění:
- studie se provádí nalačno (glukóza, tuky, minerály, které se dostávají do krve z potravin, mohou ovlivnit rychlost a kvalitu enzymové reakce);
- mezera mezi posledním jídlem a odběrem krve pro analýzu by měla být nejméně 8 hodin;
- v předvečer studie je zakázáno užívat alkohol a konzumovat tučné potraviny, jejichž doba odstranění je dlouhá;
- den před odjezdem do laboratoře se vyvarujte silného fyzického a emocionálního stresu;
- do doby odběru krve se nedoporučuje kouřit.
Aby se předešlo vzniku falešných závěrů, musí údajný pacient přijít do laboratoře o něco dříve než krev. Trvá 15-20 minut, aby člověk zachytil dech, uklidnil se. Výsledek vyšetření může ovlivnit adrenalin, který je po rychlé procházce přítomen v krvi.
Pokud pacient požádá o analýzu, vezme si o tom lékaře. Je možné, že některé z nich budou muset být po určitou dobu odmítnuty (pokud je to možné).
Výsledek analýzy PCR pro hepatitidu C
Dekódování výsledků laboratorního lékaře laboratoře, která provedla analýzu. Dekódování je stanovení odchylky výsledku získaného z normy. Rychlost ukazatelů je stanovena přímo výrobcem zkušebního systému, který laboratoř používá pro diagnostiku. Není proto překvapující, že v některých laboratořích je virová zátěž stanovena v IU / ml a v jiných v kopiích / ml.
Po obdržení závěru je nutné, aby byl schopen jej správně interpretovat. Léčba výsledků studie by měla být prováděna ošetřujícím lékařem pacienta s hepatitidou C. Pouze po objektivním, instrumentálním a laboratorním vyšetření pacienta může lékař získat dostatečné množství dat pro správnou interpretaci získaných výsledků PCR.
Vyhodnocení kvalitativní analýzy zpravidla nezpůsobuje potíže ani u pacientů. Výsledkem může být pouze jeden: "detekován" nebo "nebyl detekován." V tomto případě je druhá z nich normou.
Indikátory kvantitativní analýzy je obtížnější interpretovat. Ukazuje míru virové zátěže pacienta. Dokonce ani mezi hepatology neexistuje shoda o tom, jak léčit detekovanou virémii. Většina lékařů má sklon věřit, že by mělo být zváženo vysoké zatížení více než 8 × 10 * 5 IU / ml. Zatížení více než 1 × 10 x 7 IU / ml se považuje za velmi vysoké, zatímco nízké zatížení je menší než 4 × 10 x 5 IU / ml.
Stupeň virové zátěže indikuje virulenci (agresivitu) viru: čím větší je jeho množství v krvi, tím rychleji se mohou vyvinout komplikace jater. Vysoká koncentrace viru v krvi těhotné ženy zvyšuje pravděpodobnost jejího proniknutí hemato-placentární bariérou k plodu. Virémie také ovlivňuje účinnost léčby: při nízkém počtu je účinnost léčby vyšší než u vysokých.
Abychom byli přesvědčeni o přesnosti analýzy PCR pro hepatitidu C, je nutné dát přednost pouze těm laboratořím, které jsou dobře ověřené. Cenová politika by v tomto případě neměla hrát primární úlohu.
Studie PCR o hepatitidě C: typy, indikace, transkript
Virová hepatitida C je závažné onemocnění, které se vyskytuje při poškození jater. U osmdesáti procent pacientů se stává chronickým. Virus se množí v jaterních buňkách - hepatocytech - a způsobuje jejich smrt. Mrtvá tkáň je nahrazena ložisky pojivové tkáně, vzniká fibróza.
Jak se fibróza vyvíjí, játra nejsou schopna plnit své funkce, začíná jaterní cirhóza, která je nebezpečná kvůli jejím komplikacím: zvýšený tlak v systému portální žíly, gastrointestinální krvácení, zhoršená krevní srážlivost, mentální změny v důsledku poškození mozkových jader.
Příčinou onemocnění je infekce virem z čeledi Flaviviridae, který patří do typu RNA virů. To znamená, že genetický materiál, kterým jsou syntetizovány proteiny patogenu, je kódován v molekule ribonukleové kyseliny. Infekce se uskutečňuje skrze krev, pohlavně a od těhotné ženy k plodu. Bohužel, dostatečné množství času může projít mezi infekcí a začátkem produkce protilátek - od dvou týdnů do šesti měsíců. To neumožňuje stanovit infekci metodou ELISA a zahájit léčbu v rané fázi.
Co je to PCR analýza?
PCR je metoda molekulární analýzy, která umožňuje detekci genetického materiálu patogenu již v prvním týdnu po infekci pomocí polymerázové řetězové reakce. Studie má vysokou specificitu, přesnost a umožňuje nejen zjistit přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale také jeho koncentraci a genotyp.
Pro tuto studii se odebírá krev pacienta, ve které se může nacházet virus RNA. Primery jsou přidány do krve - uměle syntetizované oblasti požadovaného genu malé délky a RNA polymeráza je speciální enzym, který opakovaně zvyšuje množství genetického materiálu patogenu. Pomocí speciálního zařízení se provádí několik cyklů ohřevu a chlazení. Poté je materiál analyzován a porovnán se známými geny viru, na jejichž základě byl učiněn závěr o přítomnosti nebo nepřítomnosti infekce.
Typy PCR analýzy pro hepatitidu C
Existují tři typy PCR analýzy:
- Kvalitativní analýza PCR. První etapa studie. To vám umožní identifikovat genetický materiál viru v krvi.
Kvantitativní analýza PCR. Umožňuje určit virovou zátěž - koncentraci genetického materiálu patogenu v jednom mililitru krve. Tato studie se provádí před zahájením léčby a poté v první, čtvrté, dvanácté a (pokud je léčba dlouhá) dvacátého čtvrtého týdne léčby, aby se vyhodnotila její účinnost.
Indikace pro PCR analýzu hepatitidy C
Studie PCR je předepsána v následujících případech:
- kontakt s nemocnou osobou, u které by mohlo dojít k infekci;
- pozitivní enzymový imunotest;
- příznaky cirhózy jater: změna velikosti jater, zvětšená slezina, výskyt subkutánního žilního plexu na břiše;
- výskyt příznaků poškození jater: bolest v pravé břiše, zažloutnutí kůže;
- zvýšená aktivita ALT a AST v biochemické analýze krve;
- před zahájením léčby k určení virové zátěže;
- sledovat účinnost antivirové terapie;
- po léčbě ke kontrole relapsu;
- v přítomnosti diagnostikované hepatitidy B, vyloučit smíšené poškození jater.
Vysvětlení PCR studií o hepatitidě C
Dekódování PCR analýzy a enzymového imunoanalýzy hepatitidy C by měl provádět specialista na hepatolog nebo infekční onemocnění. Analýza výsledků PCR je nezbytná v kombinaci s daty biochemické analýzy krve, biopsie a ultrazvuku. Pouze kvalifikovaný lékař bude schopen analyzovat výsledky výzkumu a na jejich základě předepsat správnou léčbu.
Dekódování kvalitativní analýzy.
V analyzovaném biologickém materiálu byl nalezen genetický materiál patogenu. Infekce potvrzena.
Infekce chybí nebo je množství patogenní RNA pod hranicí citlivosti.
Dekódování kvantitativní analýzy.
Normální sazba pro zdravé lidi. To znamená, že testovaný materiál neobsahuje RNA hepatitidy C nebo jeho koncentrace je pod prahem citlivosti studie.
Koncentrace RNA je pod kvantifikačním rozsahem. Tyto výsledky jsou interpretovány velmi pečlivě, korelovány s údaji z jiných studií, často znovu studovaných.
Úroveň virové zátěže při dané koncentraci je považována za nízkou. Snížení množství viru obvykle znamená, že terapie je úspěšná.
Více než 8 * 10 ^ 5 IU / ml
Úroveň virové zátěže při dané koncentraci je považována za vysokou.
Více než 2,4 x 10 7 IU / ml
Množství RNA je nad horní hranicí rozsahu kvantifikace. S tímto výsledkem nelze vyvodit závěry o stupni virové zátěže. Obvykle se v takových případech test opakuje se zředěním vzorku krve.
Dekódování genotypizace.
Detekce RNA specifického genotypu
V biomateriálu byl detekován virus hepatitidy C určitého genotypu a subtypu. Výsledek je kódován římskými číslicemi a latinskými písmeny, například - 1a, 2b. Celkem existuje sedm genotypů a šedesát sedm podtypů, ale v Rusku existují pouze tři první typy.
Detekce RNA viru hepatitidy C
RNA byla nalezena v krvi vzácného genotypu pro Rusko, které nelze přičíst prvnímu, druhému nebo třetímu typu. Je zapotřebí dalšího výzkumu.
Tento výsledek ukazuje, že pacient je zdravý, nebo že množství patogenní RNA je příliš malé.
Je možné, že analýza PCR pro hepatitidu C je negativní a enzymová imunosorbentní analýza rozpoznává protilátky proti viru. To znamená, že pacient měl akutní hepatitidu C a zotavil se sám. Přibližně dvacet případů infekce vede ke spontánnímu uzdravení, pokud má tělo pacienta dostatečnou odolnost vůči infekci.
Ačkoli je PCR vysoce přesná, její výsledky mohou být zkresleny v následujících situacích:
- krev byla transportována do laboratoře v nevhodných podmínkách, teplota byla porušena;
- vzorek biomateriálu byl kontaminován;
- v krvi byly zbytky heparinu a jiných antikoagulancií;
- Bylo zjištěno, že výzkumníci jsou inhibitory - látky, které zpomalují nebo zastavují polymerázovou řetězovou reakci.
Výhody PCR oproti jiným metodám
- Diagnóza v raných fázích. PCR detekuje genetický materiál původce. Pomocí imunofluorescenční analýzy lze identifikovat pouze imunoglobuliny - látky, které tělo produkuje v reakci na infekci. V případě infekce hepatitidy C může být mezera mezi infekcí a nástupem imunitní odpovědi několik týdnů a měsíců, v této době bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpověď v prvním týdnu po infekci.
Nízká pravděpodobnost chyby. Ve studovaném materiálu určete oblast genetického materiálu, která je charakteristická pouze pro jeden typ patogenů. To eliminuje falešné výsledky. Když jsou možné chyby ELISA, protože stejný typ protilátky může být uvolněn proti různým virům - takové protilátky se nazývají křížové protilátky.
Jak se připravit na dárcovství krve pro výzkum PCR
Pro PCR analýzu hepatitidy C se odebírá žilní krev. Obvykle se odebírají dvě části krve z pacientovy žíly najednou: první se odešle na PCR a druhá ELISA. To se provádí s cílem přesněji posoudit, nakolik je pacient nakažen virem a jak proti němu bojuje.
Obvykle je pacient povinen dodržovat následující pravidla:
- ráno se odebere krevní test;
- Interval mezi posledním jídlem a darováním krve by měl být osm až deset hodin;
- dva nebo tři dny před analýzou je nutné opustit smažené a tučné potraviny a alkohol;
- 24 hodin před analýzou by se pacient měl vyvarovat fyzické námahy: nenosit závaží, nechodit do posilovny nebo bazénu.