Dostupnost moderních léčiv proti hepatitidě B (HBV) s jasnými indikacemi pro jejich podávání vyžaduje přesné a rychlé ověření diagnózy. Vzhledem k omezeným klinickým údajům v prvních týdnech onemocnění a omezeným analytickým metodám imunoanalýzy se však rychlost diagnózy snižuje.
Přítomnost markerů anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe vám umožní potvrdit HBV nebo zjistit skutečnost předchozí nemoci. Je však možné stanovit přítomnost aktivních virových částic v krvi a spočítat jejich počet v době studie pomocí PCR - kvantitativní real-time test pro detekci hepatitidy B. Metoda, ve srovnání s diagnostickými metodami ELISA, řeší diagnostické problémy a umožňuje předvídat průběh onemocnění při příjmu. antivirotika.
Základy diagnostiky nemocí
Diagnóza hepatitidy B je založena na hodnocení klinických projevů, enzymatických imunoanalýz a instrumentálních metod výzkumu. K onemocnění dochází v akutní fázi po inkubační době a v závislosti na dávce infekce a účinnosti léčby vstupuje do chronického stadia. Hlavním cílem léčby je zabránit chronizaci, tj. Eliminaci všech virových částic z krve. Klinický průběh onemocnění je lék bez následné virémie.
Skutečnost eliminace infekce musí být prokázána kvantitativní metodou výzkumu.
Vzhledem k tomu, že jakýkoli kvalitativní enzymový imunoanalýz umožňuje diagnostikovat HBV nepřímo, to znamená, že neprokazuje přítomnost patogenu ve vnitřním prostředí těla, ale charakterizuje imunitní reakci na infekci, sledování účinnosti léčby a skutečnost, že léčba je obtížně prokázatelná. Proto by pacient s hepatitidou B nebo s přítomností diagnostických kritérií v jeho prospěch měl být proveden polymerázovou řetězovou reakcí, aby se kvantifikoval počet virových částic v krvi. Diagnostická rychlost je nedostatek kopií DNA infekce.
Popis diagnostické metody
Vysoce citlivá metoda PCR diagnostiky hepatitidy B patří do kategorie geneticky inženýrských molekulárně biologických studií. Přes to je určeno množstvím virové DNA v biologickém materiálu pacienta a přípustné rychlosti. Podle získaných výsledků se stanoví počet virových částic na jednotku objemu. Materiál pro diagnostický test je venózní krev pacienta. Příjem je žádoucí na prázdný žaludek kvůli možnému účinku chyle séra na výsledek studie.
Získané výsledky musí být poskytnuty lékaři k interpretaci a stanovení další taktiky. Nezávislé dekódování nepředstavuje diagnostickou hodnotu.
Význam výsledku počtu virových částic získaných metodou PCR přesahuje hodnotu enzymových imunoanalýz. Protože analýza v reálném čase ukazuje přítomnost původce onemocnění v krvi, jeho informační obsah je vyšší než ostatní. Pokud ELISA indikuje pouze přítomnost protilátek, která je pozorována od 4 týdnů inkubační doby a trvá déle než 8 týdnů po eliminaci viru z krve, pak polymerázová řetězová reakce jasně potvrzuje aktivní průběh onemocnění nebo jeho vyléčení, charakterizuje dynamiku předepsané terapie.
Polymerázová řetězová reakce s kvantitativním stanovením částic patogenu řeší diagnostické otázky ve prospěch zastavení léčby z důvodu zotavení nebo pokračující terapie z důvodu její nedostatečné účinnosti. Metoda je co nejvíce specifická pro virus HBV a vyznačuje se přijatelnou chybou.
Indikace a výkonnostní cíle
Kvantitativní analýza hepatitidy B je nejspolehlivější a umožňuje potvrdit data získaná metodami ELISA. Je jmenován, když:
- získání pozitivního diagnostického výsledku testu ELISA;
- léčení pacienta s prokázanou diagnózou poškození virových jater;
- v diagnostice smíšené etiologie hepatitidy;
- v případě potřeby stanovte virovou zátěž u pacienta.
Vzhledem k tomu, že enzymová imunoanalytická metoda se v praxi specialisty na infekční onemocnění používá ve větší míře, mohou být někteří pacienti s mírným onemocněním léčeni bez nutnosti počítat virovou zátěž. PCR je však obecně považována za „zlatý standard“ diagnostiky v hepatologii, protože díky jedinečnosti jejího výsledku odstraňuje řadu organizačních problémů. Směr pacienta pro kvantitativní analýzu má tedy tyto cíle:
- získání údajů o počtu virových částic v krvi pacienta;
- potvrzení akutního průběhu hepatitidy a včasné ověření chronického onemocnění;
- stálá detekce nositelů latentního viru s pozitivními testy ELISA, sledování jejich virémie;
- rozhodování o jmenování antivirové léčby, její kombinaci a ukončení.
Nejdůležitějším cílem použití kvantitativního PCR testu pro detekci HBV je identifikace možných kombinací léčby. V případě vysoké virové zátěže dává výsledek analýzy specialistovi možnost pokračovat v kombinaci léků. V průběhu léčby je snadné stanovit účinnost předepsané farmakologické léčby na základě výsledků PCR. Pouze na základě údajů o imunoanalytických metodách není možné včas určit, jaká je léčba a její současná účinnost. Před zahájením léčby akutní hepatitidy, latentní virové infekce s vysokou virémií a chronickou HBV je proto nutná kvantitativní analýza v reálném čase.
Interpretace výsledků kvantitativních testů PCR
Interpretaci výsledků kvantitativního testu PCR by měl provádět ošetřující lékař pacienta. Je nutné vyhodnotit diagnostický ukazatel a určit terapeutickou taktiku.
Standardní analyzátor je schopen produkovat kvantitativní indikátor, který odráží počet kopií virové DNA přítomné ve studované žilní krvi. Měrné jednotky - kopie / ml, IU / ml (kopie na mililitr, mezinárodní jednotky na mililitr). Interpretace výsledků je uvedena v tabulce s uvedením různých jednotek měření.
Rozluštění krevního testu na hepatitidu B
Hepatitida B je jednou z nejnebezpečnějších onemocnění naší doby.
To je způsobeno virem, který vstupuje do těla, když krev přichází do styku s infikovaným biologickým materiálem, včetně těch, které zůstávají na manikúru, lékařských přístrojích, tetovacích strojích, které nebyly řádně vydezinfikovány. Virus může být také přenášen pohlavním stykem.
Hepatitida B je analyzována za účelem diagnostiky onemocnění odebráním pacientovy krve.
K infekci dochází prostřednictvím pohlavních a domácích cest, typem šíření je hematogenní (skrze krev). Když je infikován, virus vstupuje do hepatocytů (jaterních buněk), které jsou produkovány v budoucnu. Prostřednictvím krevního oběhu se nemoc rychle šíří po celém těle. Virus B (HBV) se vyznačuje vysokou odolností vůči účinkům teploty a kyseliny a je schopen udržet své škodlivé vlastnosti po dobu šesti měsíců.
Jaké máte krevní testy na hepatitidu B?
Pokud hepatitida B vykazuje první příznaky, je nutné před zahájením léčby a léčby provést testy. Krevní test je spolehlivým způsobem instalace infekce hepatitidy. Vedeno v laboratoři. Testovací materiál proti hepatitidě B se podává na prázdný žaludek: z posledního jídla by mělo uplynout minimálně 8 hodin.
Pro detekci viru hepatitidy B v krvi se používají testy tří typů, které charakterizují přítomnost viru v krvi:
- analýza přítomnosti HBV DNA v materiálu studiem polymerázové řetězové reakce;
- kvalitativní studie přítomnosti anti-HBc IgG proteinu a HBsAg antigenu (nalezeného u zdravých, infikovaných a nemocných);
- analýza pro detekci proteinů HBeAg a anti-HBc IgM (charakterizují zhoršení onemocnění).
Pro úplnost se doporučuje provádět současně výzkum na několika markerech.
Imunologické testy na hepatitidu B
Nejběžnější testy hepatitidy B jsou imunologické. Jejich podstatou je detekovat protilátky v krvi produkované tělem nebo játry. Vzorky jsou kvalitativní a kvantitativní. Testy a transkripty hepatitidy B obvykle obsahují informace o několika charakteristických proteinech. Během testu se testují následující protilátky:
Vyskytuje se v raných stadiích infekce před nástupem klinických příznaků.
Pozitivní marker indikuje přítomnost viru, ale nachází se také u zcela zdravých lidí. Pokud je v krvi přítomno méně než 0,05 IU / ml, výsledek se považuje za negativní. Pokud je koncentrace protilátky vyšší, analýza se považuje za pozitivní.
Nachází se prakticky u každého infikovaného pacienta. Udržování ukazatelů na vysoké úrovni může znamenat přechod onemocnění do chronické formy kurzu. Pozitivní marker indikuje přítomnost onemocnění v období exacerbace, prodloužené zotavení. HBeAg je velmi špatné znamení. Pacient je velmi nakažlivý. Normálně není protein detekován v krvi.
Existují dva typy protilátek anti-HBc: IgG a IgM. Přítomnost IgM v krvi je známkou průběhu akutní formy, vysoké infekčnosti pacienta a možnosti onemocnění pererohody v chronické formě. Normálně není přítomnost IgM povolena. IgG je příznivým ukazatelem. Marker indikuje, že tělo vytvořilo imunitu proti hepatitidě B.
Je-li v krvi detekován marker, lze vyvodit závěr o příznivém průběhu onemocnění a vytvoření ochranné imunity u pacienta.
- Anti-HBs.
Marker signalizuje obnovu a tvorbu imunity.
Detekce HBV DNA pomocí PCR
Pro laboratorní vyšetření a zjištění přítomnosti diagnózy hepatitidy B v krvi se používá metoda PCR. Způsob polymerázové řetězové reakce je nejaktuálnější v oblasti detekce onemocnění.
Konečné dekódování ukazuje, zda existují stopy genové přítomnosti patogenu v jaterních buňkách.
Jsou-li během výzkumu dodržovány všechny zásady, je výsledek naprosto přesný. Metoda se používá pro diagnostiku, používá se v procesu léčby av antivirové terapii.
- Vysoce kvalitní PCR má celkem dva významy: „detekováno“ a „nezjisteno“. Tento postup se provádí u každého pacienta s podezřením na hepatitidu. S průměrnou citlivostí testu PCR v rozmezí 10 až 500 IU / ml, s nízkou hladinou DNA viru v krvi, nebude detekován žádný genový materiál.
- Kvantitativní PCR. Na rozdíl od kvalitativního indikuje nejen hepatitidu B. Kvantitativní analýza ukazuje, jak daleko je norma zdravého člověka v číselných termínech daleko od ukazatelů pacienta. Metoda umožňuje vyhodnotit stadium onemocnění a předepsat léčbu. Citlivost testu PCR v kvantitativním sledování je vyšší než v kvalitativní metodě. Základem je počet detekované DNA, který je vyjádřen v kopiích na mililitr nebo IU / ml.
Kvantitativní PCR navíc poskytuje přehled o účincích léčby a správnosti zvolené terapie. V závislosti na množství virového genového materiálu může být učiněno rozhodnutí zkrátit dobu trvání léčby nebo ji naopak rozšířit a posílit.
Biochemický krevní test na hepatitidu B
Metoda biochemické analýzy je nutná k získání úplného klinického obrazu průběhu onemocnění. Tato diagnostická metoda umožňuje pochopení práce vnitřních orgánů (jater, ledvin, žlučníku, štítné žlázy a dalších). Dekódování dává pochopení metabolismu v těle, možných patologií metabolismu. Podrobné ukazatele indikují nedostatek vitamínů, makroživin a minerálů nezbytných pro lidské zdraví a život.
Test na hepatitidu můžete provést v jakémkoli jiném diagnostickém centru (Invitro, Gemotest atd.). Biochemický krevní test pro detekci hepatitidy B zahrnuje následující složky.
Kvantitativní analýza enzymu ALT (AlAt)
Tento enzym se nejčastěji vyskytuje ve zvýšených koncentracích při akutní a chronické hepatitidě. Látka je obsažena v jaterních buňkách a s lézemi orgánů přes krevní oběh vstupuje do krevních cév.
Množství a koncentrace v krvi během virové nemoci se neustále mění, takže výzkum je prováděn alespoň jednou za čtvrtletí. ALT neodráží pouze aktivitu viru hepatitidy, ale také stupeň poškození jater. Hladina ALT se zvyšuje s rostoucím množstvím toxických látek jaterního původu a v přítomnosti viru.
Kvantitativní analýza AST-enzymu
Protein je součástí nejdůležitějších orgánů člověka: jater, nervové tkáně, tkáně ledvin, kostry a svalů. Enzym se podílí na budování nejdůležitějšího svalu - srdce. Vysoká AST u pacienta s hepatitidou B může signalizovat fibrózu jater. Podobná situace nastává, když alkoholické, lékové nebo jiné toxické poškození jaterních buněk.
Indikátory přehřátí jsou známkou poškození jater na buněčné úrovni. Při stanovení diagnózy je třeba vzít v úvahu poměr AST a ALT (de Rytisův koeficient). Současné zvýšení koncentrace obou enzymů je známkou nekrózy jater.
Bilirubin
Látka je tvořena ve slezině a játrech v důsledku rozpadu hemoglobinu v jejich tkáních. Tato součást je součástí žluči. Existují dvě proteinové frakce: přímý bilirubin (vázaný) a nepřímý bilirubin (volný). S nárůstem hladiny bilirubinu v krvi má smysl podezření na hepatitidu nebo jiné poškození jater. To přímo souvisí s cytolýzou jaterních buněk.
Zvyšuje-li se množství nepřímého bilirubinu, je s největší pravděpodobností léze parenchymální tkáně nebo Gilbertova syndromu. Vysoká hladina bilirubinu podle výsledků analýzy může být způsobena obstrukcí žlučových cest. Když je hladina bilirubinu více než 30 mikromolů na litr, pacient vykazuje ikterický odstín kůže, moč se ztmaví a bílé oči mění barvu.
Albumin
Syntéza tohoto proteinu se vyskytuje v játrech. Pokud je jeho množství sníženo, znamená to pokles syntézy enzymů v těle v důsledku výskytu závažných lézí jaterních buněk.
Celkový protein
Pokud se množství celkového proteinu stane významně nižší než přijatá norma, pak to znamená zpomalení fungování jater.
GGT (GGTP)
Enzym používaný při detekci obstrukční žloutenky a cholecystitidy. Zvýšení hladiny GGT je signálem toxického poškození jater. Může být provokován chronickým alkoholismem a nekontrolovaným užíváním drog. Protein je zvláště citlivý na toxiny a alkohol, pod jejich vlivem jeho aktivita rychle roste. Udržování vysoké koncentrace GGT v krvi po dlouhou dobu hovoří o závažném poškození jater.
Kreatinin
Je produktem metabolismu bílkovin, který se vyskytuje v játrech. Prudký pokles hladiny je signál, že orgán zpomaluje.
Proteinové frakce
Snížení hladiny proteinových frakcí je známkou patologie jater.
Dekódovací analýza pro hepatitidu B a hodnoty jsou normální
Diagnostika hepatitidy B je souhrnná studie ukazatelů. Pouze jejich komplexní analýza umožňuje vyvodit závěry o infekci pacienta. Zvažte dekódovací analýzu pro hepatitidu B. Pro srovnání, rychlost látek v krvi.
Rozluštění krevního testu na hepatitidu B
V lékařském světě je hepatitida B považována za jednu z nejnebezpečnějších v naší době.
Tento virus je schopen přenášet při kontaktu s infikovanou krví - to mohou být nůžky pro kůžičku v nehtovém salonu, lékařské nástroje, zejména nástroje zubních lékařů, které nepodstoupily nezbytnou sterilizaci, nebo nebyly provedeny spolehlivým způsobem. Kromě toho je virus pohlavně přenášen.
Za účelem zjištění onemocnění hepatitidy B musí pacient odebrat krev k analýze.
Jak je popsáno výše, virus může být přenášen pohlavně, přes domácnosti, patří do hematogenního typu šíření. Když je infikován, virus vstupuje do jaterních buněk a odtud se začíná šířit po celém těle. Virus se šíří oběhovým systémem, je extrémně odolný vůči teplotě a zachovává si schopnost poškodit živé buňky.
Jaké máte krevní testy na hepatitidu B?
V případě, že se u člověka objeví první příznaky onemocnění hepatitidy B, měli byste okamžitě konzultovat lékaře a nechat se otestovat. Při zkoumání pacienta se odebírá krev, aby se otestovala. Krev se odebírá na lačný žaludek, poslední jídlo by mělo být nejméně 8 hodin.
Pro zjištění přítomnosti onemocnění v lidském těle je nutné provést tři typy krevních testů:
- Polymerázová řetězová reakce ukáže, zda je v buňkách HBV DNA;
- Zkontrolujte přítomnost proteinu a antigenu v krvi pacienta;
- Analýzy o přítomnosti proteinu indikují exacerbaci onemocnění.
Lékaři velmi často provádějí klinické testy na několika markerech, aby vytvořili úplný obraz onemocnění.
Imunologické testy na hepatitidu B
Během této doby jsou spolehlivé imunologické testy na hepatitidu B. Testy jsou zaměřeny na detekci protilátek v krvi, které vznikají v játrech. Testování na hepatitidu B typicky zahrnuje dekódování shromážděných dat jednotlivých proteinových buněk. Během testu věnujte pozornost těmto protilátkám:
- HBsAg - mohou být často nalezeny na začátku infekce, a to i dříve, než se choroba dá vědět. Pozitivní marker indikuje, že osoba je infikována, i když se vyskytly případy pozitivního výsledku u dokonale zdravé osoby. Výsledky jsou negativní v případě, kdy v těle pacienta není vyšší než 0,05 IU / ml, s vyšší koncentrací protilátek - analýza je pozitivní.
- HBeAg - tyto protilátky se vyskytují téměř u všech infikovaných pacientů. Při dlouhodobé vysoké koncentraci protilátek v krvi se onemocnění stává chronickou formou. Pozitivní marker znamená exacerbaci onemocnění. Přítomnost výše uvedené protilátky v těle pacienta ukazuje, že onemocnění postupuje a dosahuje vrcholu.
- Anti-HBc má dva typy protilátek - lgG a lgM. Přítomnost protilátek lgM v krvi naznačuje, že nemoc přichází na nejvyšší bod a je schopna proměnit se v chronickou formu. Lékaři musí zajistit, aby tato protilátka nezvyšovala krevní obraz. Naštěstí, lgG je dobrý, to znamená, že se vytváří imunita proti viru hepatitidy B.
- Anti-HBe - protilátka říká, že onemocnění probíhá normálním způsobem a v těle pacienta se tvoří imunita proti hepatitidě B.
- Anti-HBs - to znamená, že pacient je zdravý a jeho imunitní systém je výrazně silnější.
Detekce HBV DNA pomocí PCR
Pro klinickou studii, která pomůže určit, zda je pacient infikován virem hepatitidy B, vyberte metodu CRC. PCR znamená polymerázovou řetězovou reakci, jejímž studiem můžete zjistit přítomnost viru v těle.
Výsledky studie pomáhají určit přítomnost genového patogenu v jaterních buňkách. Při správném postupu jsou výsledky považovány za spolehlivé.
- Vysoce kvalitní RPC - pozitivní nebo negativní výsledek. Tento postup je povinný pro všechny pacienty s podezřením na infekci hepatitidou B. V případě, že virus je v malých množstvích v buňkách DNA, nebude detekován.
- Kvantitativní RPC. Tato studie ukáže nejen přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale také fázi infekce. Určením stadia nemoci můžete přiřadit nezbytný průběh lékařské terapie.
ROC mimo jiné pomáhá přesně předepsat léčbu a dokonce upravit dávkování léků. Stanoví se také doba trvání léčebné terapie, v některých případech ji lze předčasně ukončit a další pacienti vyžadují další rehabilitaci.
Biochemický krevní test na hepatitidu B
Aby byl obraz o infekci a průběhu onemocnění nezbytný, je nutné provést biochemický krevní test. Tato studie pomůže určit stav vnitřních orgánů pacienta a jak fungují. Analýzy dávají obecný přehled o metabolických procesech v těle a hovoří také o rychlosti metabolismu.
Biochemická analýza také ukáže všechny vitamíny a stopové prvky, které jsou nezbytné pro normální boj těla proti onemocnění a pro posílení imunitního systému.
Testy hepatitidy B mohou být prováděny na jakékoli klinice, soukromé nebo veřejné. Když je v lidském těle detekován virus hepatitidy B, biochemickou analýzou, existují takové složky.
Kvantitativní analýza enzymu ALT (AlAt)
Tento enzym lze nalézt ve vysokých koncentracích, s rozvojem nebo chronickou formou infekce virem hepatitidy B. Enzym je v buňkách jater a díky krevnímu oběhu se šíří všemi cévami.
Koncentrace látky v těle se neustále mění kvůli tomu, co by mělo být prováděno jednou za čtvrtletí. Díky ALT je možné zkoumat nejen aktivitu viru, ale také zhodnotit rozsah jeho negativního účinku na játra a organismus jako celek.
Kvantitativní analýza AST-enzymu
Protein je jednou z nejdůležitějších látek v lidském těle, z nichž jsou postaveny všechny životně důležité orgány, včetně srdce. S onemocněním hepatitidy B vysoká míra AST označuje jaterní fibrózu.
Vysoká míra ukazuje zničení jaterních buněk. Pro konečnou diagnózu je třeba zvážit poměr AST a ALT. S vysokou koncentrací obou enzymů se vyvíjí nekróza jater.
Bilirubin
Hemoglobin se rozkládá v tkáních jater a sleziny, díky čemuž se objevuje látka jako bilirubin. Tato složka je základem žluči. Bilirubin může být přímý a nepřímý. S vysokou koncentrací přímého bilirubinu v krvi je možné prokázat infekci hepatitidou B nebo jinými onemocněními jater.
Vysoká koncentrace nepřímého bilirubinu v krvi hovoří o Gilbertově syndromu. Vysoká koncentrace jakéhokoliv bilirubinu navíc signalizuje špatnou průchodnost žlučových cest. Při infekci hepatitidou se moč stmavne, obličej a bílé oči se stanou žlutými.
Albumin
Albumin je protein, který je syntetizován v játrech. S nízkou hladinou tohoto proteinu v těle jsou poškozeny jaterní buňky.
Celkový protein
Snížení koncentrace celkového proteinu v těle pacienta indikuje porušení jater.
GGT (GGTP)
Tento enzym používají lékaři ke zjištění žloutenky nebo cholecystitidy. Zvýšené hladiny GGT indikují toxické poškození jaterních buněk, které může nastat v důsledku chronického alkoholismu nebo otravy drogami. Protein je extrémně citlivý na alkohol a toxiny, a když jsou nadměrné, aktivita proteinu se zvyšuje.
Kreatinin
Protein metabolismus se vyskytuje v játrech, a produkt tohoto metabolismu v medicíně se nazývá kreatinin. Když hladina kreatininu klesá, játra zpomalují.
Proteinové frakce
Nízká hladina proteinových frakcí indikuje jasné porušení jater.
Dekódovací analýza pro hepatitidu B a hodnoty jsou normální
Pro diagnostiku viru je nutné provést řadu různých studií. Výsledky všech testů v komplexu poskytnou jasný obraz o onemocnění.
Podstata analýzy PCR pro hepatitidu B a její výsledky
Virová hepatitida B je úspěšně léčena, pokud je včas detekována a je správně stanoven počet protilátek a antigenů v krvi pacienta. Pomocí enzymové imunoanalýzy hepatitidy je možné detekovat přítomnost virových markerů, ale nemohou určit přesný stupeň procesu.
Pro kvantitativní vyhodnocení byla použita PCR diagnostika. Pomocí testu je možné pomocí antivirových léků spočítat počet markerů, předpovědět průběh onemocnění a pravděpodobnost vyléčení.
Hlavní výhodou této studie je schopnost detekovat i minimální koncentrace viru, identifikovat patogen ve stadiu druhu.
Diagnostika hepatitidy B
Virus hepatitidy B je vysoce nakažlivý a odolný vůči vnějším vlivům. Zůstává aktivní v krvi pacienta po dobu několika týdnů. Proto je každá osoba ohrožena infekcí, i když je pozorována profylaxe.
Pro diagnostiku nemoci předepište následující studie:
Podstata metody PCR
Americký chemik K.Mullis obdržel Nobelovu cenu a jeho diagnostická metoda se stále používá.
Předchůdce metody PCR (polymerázová řetězová reakce) je považován za vědce z Norska H. Kleppeho. Nejprve začal provádět amplifikaci (obnovu) DNA pomocí krátkého řetězce DNA, tj. Syntetického primeru (druh kopie).
Nicméně, vědec nedokázal realizovat jeho nápad. Podobná studia byla dělána americkou chemik K.Mullis, kdo v roce 1993 získal Nobelovu cenu za jeho vynález. Od té doby, PCR byla používána založit otcovství, diagnostikovat genetická onemocnění a detekovat viry.
Podstatou reakce je, že pomocí enzymů se zkopíruje určitý kus DNA. Můžete kopírovat pouze oblast, která odpovídá zadaným parametrům a pokud je v prezentovaném vzorku. K zahájení reakce se používají následující složky:
- Matrix DNA s místem, které má být zkopírováno.
- Primery podobné struktuře DNA.
- Polymeráza, tj. Enzym, který vyvolává reakci. Mělo by být termostabilní, tj. Odolávat teplotním extrémům.
- Řešení s určitými parametry, zajištění průchodu reakce.
Reakce se provádí v několika stupních:
Pro detekci hepatitidy B se používají dva typy reakcí: kvantitativní a kvalitativní.
Kvantitativní PCR
Kvantitativní metoda určuje množství genomu HBV
Kvantitativní PCR zahrnuje současné vytváření kopií fragmentů DNA a stanovení počtu molekul. Měření se provádí po každé fázi, to znamená v reálném čase. Toho je dosaženo použitím fluorescenčních sond, které jsou zahrnuty v řetězci molekul a záře v určitém období studie.
Tato metoda se používá k detekci fragmentů DNA, které jsou markery viru hepatitidy. Pomocí kvantitativní metody je možné přesně izolovat genotyp viru. Jinými slovy se vypočítá počet kopií genomu HBV na počet buněk pacienta.
Kvantitativní analýza poskytuje odpovědi na následující otázky:
- S jakou intenzitou onemocnění postupuje.
- Jak účinná je léčba.
- Vyvinula se rezistence na léky?
Kvantitativní měření je také nezbytné pro diagnostiku chronického stadia infekce. Pokud je množství DNA nižší než 100 ks / ml na normální úrovni transaminázy, pak je osoba nositelem viru.
V akutní fázi je množství protilátek mnohem vyšší, při antivirové terapii zvýšení počtu protilátek indikuje vývoj rezistence na léčivo, což je signál pro úpravu léčby.
Vysoce kvalitní PCR
Vysoce kvalitní PCR poskytuje méně informací, ale může eliminovat infekci.
Vysoce kvalitní PCR může pouze prokázat přítomnost patogenu v krvi. Pokud jsou nepřítomni, pacient není infikován, pokud patogen vstoupí do krve, výsledek bude pozitivní.
S pomocí kvalitativní reakce však není možné objasnit genom viru, stadium nemoci. Pro diagnostiku HBV proto bylo provedeno kvantitativní i kvalitativní měření.
Příprava na průzkum
Pro analýzu PCR je nutná žilní krev. To musí být provedeno ráno nalačno.
Pacient by se měl na studii řádně připravit:
- Po dobu 10 hodin odmítnout jídlo, můžete pít pouze čistou vodu.
- V předvečer přestat užívat alkohol, po dobu 4 hodin nekouřit.
- Před vyšetřením se vyvarujte fyzického a emocionálního stresu.
- Přestat užívat léky po dobu 2 dnů, pokud to není možné, je nutné informovat laboratorního technika. Některé drogy mají vliv na konečný výsledek.
Interpretace údajů
V kvantitativní reakci jsou získané indikátory vyhodnoceny v závislosti na počtu kopií DNA.
Je snadné interpretovat data měření kvality. On dává buď pozitivní nebo negativní odpověď.
V kvantitativní reakci lze získané indikátory odhadnout v závislosti na počtu kopií DNA. Měrnou jednotkou jsou kopie / ml.
Data se dekódují následovně:
- Pokud je množství DNA HBV menší než 90, pak infekce chybí. U pacienta se vyvinula imunita po očkování, nebo byl vyléčen z nemoci.
- Když se počet kopií 2x100 hovoří o nosiči viru.
- Počet 2x106 označuje chronické stadium onemocnění.
- U DNA více než 2x109 má pacient akutní stadium hepatitidy.
Chybné výsledky
Výhody diagnostické metody využívající polymerázové reakce jsou následující: t
- Přímá detekce patogenů. Naproti tomu ELISA poskytuje informace o přítomnosti protilátek proti viru.
- Specifičnost. To znamená, že je to DNA oblast, která je přítomna ve vzorku biomateriálu, který je kopírován.
- Přecitlivělost. Metoda může dokonce detekovat fragmenty jednotlivých buněk.
- Diagnostika onemocnění v akutních a latentních stadiích. To znamená, že onemocnění je možné diagnostikovat ve stadiu preklinických projevů.
Metoda má nedostatky, které vedou k falešným výsledkům. Nejvýznamnější nevýhodou je pravděpodobnost kontaminace materiálu. Hlavním zdrojem kontaminace jsou špatně zpracované zkumavky, laboratorní ruce, reagencie.
Část DNA z předchozí reakce může vstoupit do krve. Laboratoře proto kladou zvýšené hygienické požadavky: oddělené místnosti, plastové trubky, ultrafialové zpracování laboratoří atd.
Falešně negativní výsledky mohou být způsobeny sníženou citlivostí reakce. To se děje v následujících situacích:
- pacient užívá léky, například antikoagulancia;
- člověk před analýzou utrpěl fyzickou zátěž (sport, tvrdá práce);
- v nedávné době.
Pokud má pacient vysokou pravděpodobnost infekce a výsledek studie je negativní, musí být znovu vyšetřen.
Viz také:
Závěr
Metoda polymerázové řetězové reakce je hlavní a nejinformativnější pro diagnostiku HBV. To umožňuje nejen stanovit stav nositele infekce, ale také objasnit stadium onemocnění, vyhodnotit výsledky léčby.
Pro přesnější diagnostiku se používá kvalitativní a kvantitativní měření. Nevýhodou metody je pravděpodobnost kontaminace, snížená citlivost a poměrně vysoká cena.
Aby výsledky byly nejspolehlivější, je třeba se na studii řádně připravit a provádět ji na klinice s příslušnou licencí a dobrou pověstí.