PCR hepatitidy B

Dostupnost moderních léčiv proti hepatitidě B (HBV) s jasnými indikacemi pro jejich podávání vyžaduje přesné a rychlé ověření diagnózy. Vzhledem k omezeným klinickým údajům v prvních týdnech onemocnění a omezeným analytickým metodám imunoanalýzy se však rychlost diagnózy snižuje.

Přítomnost markerů anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe vám umožní potvrdit HBV nebo zjistit skutečnost předchozí nemoci. Je však možné stanovit přítomnost aktivních virových částic v krvi a spočítat jejich počet v době studie pomocí PCR - kvantitativní real-time test pro detekci hepatitidy B. Metoda, ve srovnání s diagnostickými metodami ELISA, řeší diagnostické problémy a umožňuje předvídat průběh onemocnění při příjmu. antivirotika.

Základy diagnostiky nemocí

Diagnóza hepatitidy B je založena na hodnocení klinických projevů, enzymatických imunoanalýz a instrumentálních metod výzkumu. K onemocnění dochází v akutní fázi po inkubační době a v závislosti na dávce infekce a účinnosti léčby vstupuje do chronického stadia. Hlavním cílem léčby je zabránit chronizaci, tj. Eliminaci všech virových částic z krve. Klinický průběh onemocnění je lék bez následné virémie.

Skutečnost eliminace infekce musí být prokázána kvantitativní metodou výzkumu.

Vzhledem k tomu, že jakýkoli kvalitativní enzymový imunoanalýz umožňuje diagnostikovat HBV nepřímo, to znamená, že neprokazuje přítomnost patogenu ve vnitřním prostředí těla, ale charakterizuje imunitní reakci na infekci, sledování účinnosti léčby a skutečnost, že léčba je obtížně prokázatelná. Proto by pacient s hepatitidou B nebo s přítomností diagnostických kritérií v jeho prospěch měl být proveden polymerázovou řetězovou reakcí, aby se kvantifikoval počet virových částic v krvi. Diagnostická rychlost je nedostatek kopií DNA infekce.

Popis diagnostické metody

Vysoce citlivá metoda PCR diagnostiky hepatitidy B patří do kategorie geneticky inženýrských molekulárně biologických studií. Přes to je určeno množstvím virové DNA v biologickém materiálu pacienta a přípustné rychlosti. Podle získaných výsledků se stanoví počet virových částic na jednotku objemu. Materiál pro diagnostický test je venózní krev pacienta. Příjem je žádoucí na prázdný žaludek kvůli možnému účinku chyle séra na výsledek studie.

Získané výsledky musí být poskytnuty lékaři k interpretaci a stanovení další taktiky. Nezávislé dekódování nepředstavuje diagnostickou hodnotu.

Význam výsledku počtu virových částic získaných metodou PCR přesahuje hodnotu enzymových imunoanalýz. Protože analýza v reálném čase ukazuje přítomnost původce onemocnění v krvi, jeho informační obsah je vyšší než ostatní. Pokud ELISA indikuje pouze přítomnost protilátek, která je pozorována od 4 týdnů inkubační doby a trvá déle než 8 týdnů po eliminaci viru z krve, pak polymerázová řetězová reakce jasně potvrzuje aktivní průběh onemocnění nebo jeho vyléčení, charakterizuje dynamiku předepsané terapie.

Polymerázová řetězová reakce s kvantitativním stanovením částic patogenu řeší diagnostické otázky ve prospěch zastavení léčby z důvodu zotavení nebo pokračující terapie z důvodu její nedostatečné účinnosti. Metoda je co nejvíce specifická pro virus HBV a vyznačuje se přijatelnou chybou.

Indikace a výkonnostní cíle

Kvantitativní analýza hepatitidy B je nejspolehlivější a umožňuje potvrdit data získaná metodami ELISA. Je jmenován, když:

1. získání pozitivního diagnostického výsledku testu ELISA;
2. léčení pacienta s prokázanou diagnózou poškození virových jater;
3. v diagnostice smíšené etiologie hepatitidy;
4. v případě potřeby stanovte virovou zátěž u pacienta.

Vzhledem k tomu, že enzymová imunoanalytická metoda se v praxi specialisty na infekční onemocnění používá ve větší míře, mohou být někteří pacienti s mírným onemocněním léčeni bez nutnosti počítat virovou zátěž. PCR je však obecně považována za „zlatý standard“ diagnostiky v hepatologii, protože díky jedinečnosti jejího výsledku odstraňuje řadu organizačních problémů. Směr pacienta pro kvantitativní analýzu má tedy tyto cíle:

• získání údajů o počtu virových částic v krvi pacienta;
• potvrzení akutního průběhu hepatitidy a včasné ověření chronického onemocnění;
• stálá detekce nositelů latentního viru s pozitivními testy ELISA, sledování jejich virémie;
• rozhodování o jmenování antivirové léčby, její kombinaci a ukončení.

Nejdůležitějším cílem použití kvantitativního PCR testu pro detekci HBV je identifikace možných kombinací léčby. V případě vysoké virové zátěže dává výsledek analýzy specialistovi možnost pokračovat v kombinaci léků. V průběhu léčby je snadné stanovit účinnost předepsané farmakologické léčby na základě výsledků PCR. Pouze na základě údajů o imunoanalytických metodách není možné včas určit, jaká je léčba a její současná účinnost. Před zahájením léčby akutní hepatitidy, latentní virové infekce s vysokou virémií a chronickou HBV je proto nutná kvantitativní analýza v reálném čase.

Interpretace výsledků kvantitativních testů PCR

Interpretaci výsledků kvantitativního testu PCR by měl provádět ošetřující lékař pacienta. Je nutné vyhodnotit diagnostický ukazatel a určit terapeutickou taktiku.

Standardní analyzátor je schopen produkovat kvantitativní indikátor, který odráží počet kopií virové DNA přítomné ve studované žilní krvi. Měrné jednotky - kopie / ml, IU / ml (kopie na mililitr, mezinárodní jednotky na mililitr). Interpretace výsledků je uvedena v tabulce s uvedením různých jednotek měření.

Studie na viru hepatitidy B (ELISA a PCR) t

Antigen „s“ viru hepatitidy B (HBsAg)

Povrchový antigen hepatitidy B v séru obvykle chybí.
Detekce povrchového antigenu hepatitidy B (HBsAg) v séru potvrzuje akutní nebo chronickou infekci virem hepatitidy B.

Při akutním onemocnění je HBsAg detekován v séru v posledních 1-2 týdnech inkubační doby a prvních 2-3 týdnů klinického období. Cirkulace HBsAg v krvi může být omezena na několik dní, proto byste měli usilovat o včasné počáteční vyšetření pacientů. Metoda ELISA umožňuje detekci HBsAg u více než 90% pacientů. Téměř u 5% pacientů nejcitlivější výzkumné metody nedetekují HBsAg, v takových případech je etiologie virové hepatitidy B potvrzena přítomností anti-HBcAg JgM nebo PCR.

Koncentrace HBsAg v séru ve všech formách závažnosti hepatitidy B ve výšce onemocnění má značný rozsah výkyvů, existuje však určitý model: v akutním období existuje inverzní vztah mezi koncentrací séra HBsAg v séru a závažností onemocnění.

Vysoké koncentrace HBsAg jsou častější u mírných a středně závažných forem onemocnění. V těžkých a maligních formách je koncentrace HBsAg v krvi často nízká a u 20% pacientů s těžkou formou a ve 30% s maligním antigenem v krvi nemusí být vůbec detekována. Vzhled na tomto pozadí u pacientů s protilátkami proti HBsAg je považován za nepříznivý diagnostický znak; je stanovena v maligních formách hepatitidy B.

V akutním průběhu hepatitidy B se koncentrace HBsAg v krvi postupně snižuje až do úplného vymizení tohoto antigenu. HBsAg vymizí u většiny pacientů do 3 měsíců od nástupu akutní infekce.

Snížení koncentrace HBsAg o více než 50% do konce třetího týdne akutního období zpravidla indikuje ukončení procesu infekce. Obvykle je u pacientů s vysokou koncentrací HBsAg ve výšce onemocnění zjištěna v krvi několik měsíců.
U pacientů s nízkými koncentracemi HBsAg mizí mnohem dříve (někdy i několik dní po nástupu onemocnění). Obecně je doba detekce HBsAg v rozmezí od několika dnů do 4-5 měsíců. Maximální doba detekce HBsAg s hladkým průběhem akutní hepatitidy B nepřesahuje 6 měsíců od nástupu onemocnění.

HBsAg lze nalézt u zdravých lidí, zpravidla v profylaktických nebo náhodných studiích. V takových případech se vyšetřují další markery virové hepatitidy B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg a studují se jaterní funkce.

V případě negativních výsledků jsou nutné opakované studie na HBsAg.
Pokud opakované krevní testy po dobu delší než 3 měsíce odhalí HBsAg, je tento pacient klasifikován jako chronický pacient s virovou hepatitidou B.
Přítomnost HBsAg je poměrně běžná. Na světě je více než 300 milionů dopravců a v naší zemi je asi 10 milionů dopravců.
Ukončení cirkulace HBsAg s následnou sérokonverzí (tvorba anti-HBs) vždy indikuje regeneraci organismu.

Krevní test na přítomnost HBsAg se používá pro následující účely:

pro diagnostiku akutní hepatitidy B:

• inkubační doba;
• akutní onemocnění;
• včasné uzdravení;
  

pro diagnostiku chronické virové hepatitidy B;

pro nemoci:

• trvalé chronické hepatitidy;
• cirhóza jater;

pro screening a identifikaci pacientů v rizikových skupinách: t

pacienti s častými hemotransfuzemi;

pacienti s chronickým selháním ledvin;

pacienti s vícečetnou hemodialýzou;

pacientů se stavem imunodeficience, včetně AIDS.

Vyhodnocení výsledků výzkumu

Výsledky studie jsou vyjádřeny kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek indikuje nepřítomnost séra HBsAg. Pozitivní výsledek - identifikace HBsAg indikuje inkubaci nebo akutní období akutní virové hepatitidy B, stejně jako chronické virové hepatitidy B.

Protilátky proti jadernému antigenu viru hepatitidy B JgG (anti-HBcAg JgG)

Sérum anti-HBcAg obvykle není přítomno v séru.
U pacientů s anti-HBcAg se JgG objevuje v akutním období virové hepatitidy B a přetrvává po celý život. Anti-HBcAg JgG je hlavním markerem přenesené HBV.

K diagnostice anti-HBcAg JgG se používají krevní testy:

chronická virová hepatitida B v přítomnosti HBs antigenu v séru;

virová hepatitida B.

Vyhodnocení výsledků výzkumu

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek indikuje nepřítomnost sérového anti-HBcAg JgG. Pozitivní výsledek - identifikace anti-HBcAg JgG indikuje akutní infekci, rekonvalescenci nebo dříve přenesenou virovou hepatitidu B.

"E" antigen viru hepatitidy B (HBeAg)

Normálně HBeAg v séru chybí.
HBeAg lze nalézt v séru většiny pacientů s akutní virovou hepatitidou B. Obvykle zmizí v krvi před antigenem HBs. Vysoká hladina HBeAg v prvních týdnech nemoci nebo její detekce po dobu delší než 8 týdnů je důvodem k podezření na chronickou infekci.

Tento antigen je často detekován při chronické aktivní hepatitidě virové etiologie. Zvláštní význam v definici HBeAg má skutečnost, že její detekce charakterizuje aktivní replikativní fázi infekčního procesu. Bylo zjištěno, že vysoké koncentrace HBeAg odpovídají vysoké aktivitě DNA polymerázy a charakterizují aktivní replikaci viru.

Přítomnost HBeAg v krvi ukazuje jeho vysokou infekčnost, tj. přítomnost aktivní infekce hepatitidy B v těle, která je vyšetřována, a je detekována pouze v přítomnosti antigenu HBs v krvi. U pacientů s chronickou aktivní hepatitidou se antivirotika používají pouze v případě, že je v krvi detekován HBeAg. HBeAg - antigen - marker akutní fáze a replikace viru hepatitidy B.

K diagnóze se používá krevní test na přítomnost antigenu HBe:

inkubační doba virové hepatitidy B;

prodromální období virové hepatitidy B;

akutní období virové hepatitidy B;

chronická perzistující virová hepatitida B.

Vyhodnocení výsledků výzkumu

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek indikuje nepřítomnost HBeAg v séru. Pozitivní výsledek - detekce HBeAg indikuje inkubaci nebo akutní období akutní virové hepatitidy B nebo pokračující replikaci viru a infekci pacienta.

Protilátky proti antigenu "e" viru hepatitidy B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg v séru obvykle chybí. Vzhled protilátek anti-HBeAg obvykle indikuje intenzivní odstranění viru hepatitidy B z těla a menší infekci pacienta.

Tyto protilátky se objevují v akutním období a přetrvávají až 5 let po infekci. Při chronické perzistující hepatitidě se anti-HBeAg nachází v krvi pacienta spolu s HBsAg. Sérokonverze, tj. přechod HBeAg na anti-HBeAg, s chronickou aktivní hepatitidou, častěji prognosticky příznivý, ale stejná sérokonverze nezlepšuje prognózu těžké cirhotické transformace jater.

Krevní testy na přítomnost anti-HBeAg se používají v následujících případech v diagnostice virové hepatitidy B:

stanovení počáteční fáze onemocnění;

akutní infekce;

včasné uzdravení;

rekonvalescence;

pozdní fáze obnovy.

diagnóza nedávno přenesené virové hepatitidy B;

diagnostika chronické perzistující virové hepatitidy B.

Vyhodnocení výsledků výzkumu

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek ukazuje absenci protilátek proti HBeAg v séru. Pozitivním výsledkem je detekce protilátek proti HBeAg, což může indikovat počáteční stadium akutní virové hepatitidy B, akutní období infekce, časné stadium rekonvalescence, rekonvalescence, nedávno přenesenou virovou hepatitidu B nebo perzistující virovou hepatitidu B.

Kritéria pro přítomnost chronické hepatitidy B jsou:

detekci nebo periodické detekci HBV DNA v krvi;

kontinuální nebo periodické zvyšování aktivity ALT / AST v krvi; t

morfologické příznaky chronické hepatitidy při histologickém vyšetření biopsie jater.

Detekce viru hepatitidy B pomocí PCR (kvalitativně) t

Virus hepatitidy B v krvi obvykle chybí.
Kvalitativní stanovení viru hepatitidy B metodou PCR v krvi umožňuje potvrdit přítomnost viru v těle pacienta, a tím stanovit etiologii onemocnění.

Tato studie poskytuje užitečné informace pro diagnostiku akutní virové hepatitidy B v inkubaci a časných vývojových stadiích onemocnění, kdy hlavní pacientovy sérologické markery v krvi mohou chybět. Sérová virová DNA je detekována u 50% pacientů v nepřítomnosti HBeAg. Analytická citlivost metody PCR není menší než 80 virových částic v 5 μl, poslední vzorek detekce DNA, specificita - 98%.

Tato metoda je důležitá pro diagnostiku a sledování průběhu chronické HBV. Přibližně 5-10% případů cirhózy a dalších chronických onemocnění jater je způsobeno chronickým nosičem viru hepatitidy B. Markery aktivity těchto onemocnění jsou přítomnost HBeAg a DNA viru hepatitidy B v krvi.

Metoda PCR umožňuje stanovit v krvi DNA viru hepatitidy B jak kvalitativně, tak kvantitativně. Stanovený fragment v obou případech je jedinečná DNA sekvence genu strukturního proteinu viru hepatitidy B.

Detekce DNA viru hepatitidy B v biomateriálu pomocí PCR je nezbytná pro:

řešení sporných výsledků sérologických testů;

detekce akutního stadia onemocnění ve srovnání s předchozí infekcí nebo kontaktem;

kontrolovat účinnost antivirové léčby.

Vymizení DNA z hepatitidy B z krve je známkou účinnosti léčby

Detekce viru hepatitidy B pomocí PCR (kvantitativní)

Tato metoda poskytuje důležité informace o intenzitě vývoje onemocnění, účinnosti léčby a rozvoji rezistence na aktivní léčiva.
Pro diagnózu virové hepatitidy pomocí PCR v séru se používají testovací systémy, jejichž citlivost je 50-100 kopií ve vzorku, což umožňuje detekci viru v koncentraci 5 X 103 ^ -104 kopií / ml. PCR při virové hepatitidě B je rozhodně nezbytná pro posouzení virové replikace.

Sérová virová DNA je detekována u 50% pacientů v nepřítomnosti HBeAg. Krevní sérum, lymfocyty a hepatobiopsie mohou sloužit jako materiál pro detekci DNA viru hepatitidy B.

• Hodnocení hladiny virémie je následující:
• méně než 2,10 ^ 5 kopií / ml (méně než 2,10 ^ 5 IU / ml) - nízká virémie;
• od 2,10 ^ 5 kopií / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) do 2,106 6 kopií / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - střední virémie;
• více než 2,10 ^ 6 kopií / ml - vysoká virémie.

Existuje vztah mezi výsledkem akutní virové hepatitidy B a koncentrací DNA HBV v krvi pacienta. S nízkou hladinou virémie se proces chronizace infekce blíží nule, s průměrem, proces je chronizován u 25-30% pacientů as vysokou úrovní virémie se akutní virová hepatitida B nejčastěji stává chronickou.

Indikace pro léčbu chronického HBV interferonu-alfa by měly být považovány za přítomnost markerů aktivní replikace viru (detekce HBV HBV, HBeAg a HBV DNA v krevním séru během předchozích 6 měsíců).

Kritéria pro hodnocení účinnosti léčby jsou vymizení HBEAg a HBV DNA v krvi, která je obvykle doprovázena normalizací hladin transamináz a dlouhodobou remisí onemocnění, DNA HBV zmizí z krve do 5. měsíce léčby u 80% pacientů. Snížení hladiny virémie o 85% nebo více do třetího dne od zahájení léčby ve srovnání s výchozím stavem je rychlé a poměrně přesné kritérium pro predikci účinnosti léčby.

PCR analýza pro hepatitidu B

DNA virus rodiny Hepadnaviridae je přímým původcem hepatitidy B. Analýza hepatitidy B pomocí PCR umožňuje detekci viru infikované DNA v krvi pacienta. Výsledek pozitivního typu na DNA HBV demonstruje přítomnost infekce v krvi pacienta. Je třeba poznamenat, že diagnostika pomocí analýzy PCR umožňuje nejen zjistit přítomnost infekce, ale také její kvantitativní zatížení a aktivitu. Tato metoda je spolehlivá, přesná a reprodukovatelná. Kvantifikace HBV DNA pomocí qPCR může být použita ke sledování účinnosti terapie HBV a může být užitečná pro pochopení přirozené historie HBV v endemické oblasti.

K infekci hepatitidou B dochází prostřednictvím domácího nebo sexuálního kontaktu - přímým kontaktem s infikovanou krví. Po infekci virus vstupuje do jaterních buněk, ve kterých pokračuje ve své aktivní reprodukci. Po celém těle se šíří patogenní buňky krevním oběhem. Stojí za zmínku, že buňky hepatitidy B jsou vysoce odolné vůči kyselinám a vysokým teplotám. Je schopen udržet své škodlivé vlastnosti po dobu šesti měsíců.

Typy PCR pro hepatitidu B

K dnešnímu dni jsou předepsány dva typy diagnostiky, pokud máte podezření na přítomnost viru hepatitidy B: kvalitativní PCR (umožňuje stanovit se 100% přesností přítomnost viru v krvi) a kvantitativní PCR (umožňuje určit stupeň aktivity viru).

Vysoce kvalitní PCR se předepisuje, pokud existuje podezření na infekci HBV, nebo pokud jiné diagnostické metody nepřinesly jasné výsledky. Tento typ PCR analýzy je velmi snadno dešifrovatelný: negativní (žádný virus nebyl detekován v krvi), pozitivní (virus detekován v krvi). Hlavním úkolem kvalitativní analýzy je zjistit přítomnost infikovaných buněk v raných stadiích onemocnění. Pokud byl virus diagnostikován dva týdny po údajné infekci, účinnost léčby bude mnohem vyšší. Pokud je virus v krvi asi dva měsíce, onemocnění se stává chronickým, proto nemůže být úplně vyléčeno.

Pokud kvalitativní diagnóza potvrdí přítomnost HBV v krvi, lékař předepíše kvantitativní analýzu.

Kvantitativní analýza umožňuje určit aktivitu vývoje viru v těle pacienta. Tento typ PCR analýzy je přiřazen:

• určit stadium onemocnění;
• sledovat účinnost aplikované terapie;
• pro stanovení úrovně rezistence viru vůči konkrétnímu léku;
• pro výběr léků.

Kvantitativní ukazatele viru v krvi jsou měřeny v IU na mililitr nebo DNA na mililitr.

Pokud lékař předepíše kvantitativní diagnózu okamžitě, bez kontroly kvalitativního, pak se za normu považuje 75 IU na mililitr. Pokud je detekováno méně mezinárodních jednotek, výsledkem je, že HBV není detekován, když jsou hodnoty nad normální, přítomnost virové hepatitidy B je diagnostikována.

Interpretace kvantitativní diagnostiky

Následující ukazatele (v kopiích / mililitrech) jsou považovány za normu CRP u hepatitidy B: méně než 10 3 - neaktivní virus; od 10 4 do 10 5 - virus je obvykle neaktivní; 10 - aktivní virus; 10 - virus ve vysokém stupni aktivity.

Na základě kvantitativních ukazatelů lze určit se 100% přesností formu onemocnění (nosič, akutní nebo chronická), reakci viru na léčbu, potřebu další diagnostiky.

Chronická forma hepatitidy B je stanovena, pokud je aktivita viru 105 kopií na mililitr. Dopravce je diagnostikován v případě, že skóre je nižší než 105 kopií na mililitr.

Během období léčby je nutné pravidelně (jednou za tři měsíce) opakovat kvantitativní diagnostiku, aby bylo možné v době, kdy se virus vyvíjí imunitu k užívaným léčivům, změnit metodu. Pokud byly všechny studie provedeny správně a byla vybrána účinná léčba, opakovaná analýza (po třech dnech léčby) ukáže snížení aktivity patogenních buněk alespoň o osmdesát pět procent.

Jaterní biopsie se provádí pouze v případě, kdy šestiměsíční léčba ukázala, že hladiny ALT jsou dvakrát vyšší než normální hodnoty a PCR diagnostika ukazuje rychlost nižší než 105 kopií na mililitr krve.

Příprava na průzkum

Pro analýzu je nutná žilní krev. Aby bylo možné získat co nejpřesnější výsledky, je nutné se na postup připravit: odmítnout odebrat potravu nejméně osm hodin před odběrem krve; na dva dny odmítnout léčbu drogami (je nutné upozornit lékaře na užívání léků); před darováním krve musíte strávit dvacet minut v klidovém režimu; Dvanáct hodin před zákrokem se vzdávejte sportovních cvičení, alkoholických nápojů, kouření a jíst tučné potraviny.

Je důležité: pokud je diagnóza nutná u dítěte mladšího než 5 měsíců, musí každých deset minut před odběrem krve dát sklenici vařené vody.

Shrnutí

PCR analýza hepatitidy B je dnes nejpřesnější metodou pro diagnostiku viru. Metoda umožňuje určit mutované a skryté formy onemocnění, diagnostikovat nemoc v prvních dnech infekce, proto zvolit nejúčinnější léčbu. Laboratorní asistent porovnává výsledky analýzy s normou a následně je uvádí do závěru. Data jsou zpracována do dvou týdnů. Pro získání doporučení pro analýzu PCR je nutné kontaktovat hepatologa, specialistu na infekční onemocnění nebo virologa. Je důležité si uvědomit, že čím dříve se dostanete k lékaři, tím rychleji budou výsledky dosaženy, a proto bude léčba efektivnější.

Vysvětlení PCR a biochemické analýzy hepatitidy

Hepatitida je zánětlivý proces v játrech vyplývající z destrukce jeho buněk toxickými látkami. Rozluštění analýzy hepatitidy umožňuje objektivně posoudit zdravotní stav pacienta trpícího onemocněním jater. Lékař infekčních onemocnění vám sdělí, jak porozumět výsledkům studie a předepsat další léčbu. Pacient, který nezávisle na získaných údajích studoval, vyvodí určité závěry, které ne vždy odpovídají skutečnosti.

Virus hepatitidy B je obsažen v séru a specifické laboratorní diagnostické metody umožňují detekci patogenních antigenů a protilátek proti němu.

Seznam testů hepatitidy

Diagnóza virového zánětu jater je potvrzena speciálními studiemi. Před zahájením léčby se pacient testuje:

1. Pacientka poskytuje krev pro výzkum ráno, mezi 7.00 a 9.00 hodin. Pacient by se měl zdržet po dobu 12 hodin. Kvantitativní analýza hepatitidy B určuje přítomnost viru a titru protilátek v séru. Současně lékař předepíše studii, která identifikuje HBV DNA pomocí PCR reakcí.
2. U infikovaných pacientů je prokázána přítomnost anti-HBc IgG proteinu a HBsAg antigenu. Specifický imunoglobulin indikuje rychlý nárůst koncentrace viru hepatitidy v séru pacienta. V případě negativního testu na anti-HBc se IgG provádí další výzkum přítomnosti dalších onemocnění.
3. Studium období exacerbace onemocnění určují imunoglobuliny HBeAg a anti-HBc IgM. Stanovení správné diagnózy je možné pouze po zjištění virové RNA - hepatitida je v tomto případě potvrzena molekulárně biologickou metodou.
4. PCR je široce používána pro diagnostiku onemocnění jater - kvantitativní metoda umožňuje předepisovat účinnou léčbu hepatitidy.

Imunologická studie

Pro stanovení schopnosti pacienta vypořádat se s nebezpečným virem, diagnostikovat úroveň odporu těla. Vzhledem k celému komplexu laboratorních studií jsou stanoveny kvantitativní a kvalitativní ukazatele imunologických faktorů - protilátky proti hepatitidě B.

HBsAg protein je povrchový antigen, který je součástí superkapsidu (virového obalu) patogenu. Jeho hlavní funkcí je účast na procesu adsorpce viru zdravými jaterními buňkami. Peptid HBsAg je odolný vůči faktorům prostředí - zásaditosti (Ph = 10), 2% roztoku chloraminu a fenolu.

Marker HBsAg je přítomen v séru infikované osoby. Bezprostředně po svém objevení RNA nejen překládá svou syntézu, ale také obsahuje jádrové částice Ar předchozího markeru. Je důkazem vývoje aktivní fáze hepatitidy.

Přítomnost HBeAg u chronického pacienta indikuje začátek aktivní fáze infekčního procesu.

Anti-HBc marker obsahuje 2 typy protilátek - IgG a IgM. Jedná se o protein specifický pro jeden antigen. Akutní forma onemocnění je charakterizována přítomností anti-HBc a IgM. Jejich pozitivní hodnota indikuje předchozí onemocnění jater.

Kvantitativní analýza

Pro stanovení aktivity patogenu předepsat PCR analýzu. Stanovuje úroveň virové zátěže a šance, že se pacient zotaví. Polymerázová řetězová reakce se provádí po skončení latentního období. Ve výzkumném procesu je stanoven nejen HBsAg, ale také marker HBeAg.

Dekódování PCR analýzy pro hepatitidu umožňuje určit stupeň aktivity patologického procesu a účinnost komplexní terapie.

Lékař určuje, jak citlivé je tělo pacienta na antivirotika, a zda je možné přijmout opatření k odstranění příčin chronického onemocnění jater. V tomto případě se index transaminázy zvyšuje a index aktivity kauzativní látky je několikrát vyšší než normální index, koncentrace aminokyselin je více než 106 kopií DNA na ml.

Norma transaminázy v krvi odpovídá hodnotám enzymů AsAT a AlAT. Alaninaminotransferáza u žen nepřekračuje 32 U / l au mužů 40 U / l. Koncentrace viru u lidí infikovaných v raném věku je 100 000 kopií na ml.

V neaktivní fázi viru a v případě anti-HBc je HBV DNA v rozmezí 2000 IU / ml a počet kopií nepřesahuje 10 000.

Metoda molekulární hybridizace

Reakce ELISA na hepatitidu určuje typ antigenu s protilátkami a enzymy. Fázový výzkum je přijatelný, ale pouze odborník, který včas obdržel výsledek analýzy, může provést správnou diagnózu.

Markery virové hepatitidy během imunotestu jsou HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Při nástupu onemocnění jsou zvýšené: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg je 1,239, virová DNA není detekována. Po léčbě výsledek analýzy ukazuje pokles HBsAg na 1,07 a HBeAg se stává negativním. Je přítomna DNA viru.

Jsou-li získány negativní hodnoty IgM, IgG, IgA - je nutné určit, zda onemocnění chybí nebo zda došlo k úplnému uzdravení.

Pozitivní hodnota IgG označuje plně vytvořenou imunitu. V tomto případě není detekován IgM. Je důležité vědět, že studie o hepatitidě odhalila vysoký titr IgM.

V akutním období onemocnění se objevují negativní hodnoty IgG. Remise virového onemocnění je doprovázena negativním imunoglobulinem IgM. ELISA je relativně jednoduchá a bezpečná pro zdraví pacienta.

Biochemický krevní test

Studium séra identifikuje patologii v těle, určuje diagnózu, umožňuje vyhodnotit práci jater a získat informace o metabolismu. Biochemická analýza se provádí ráno. Pro výzkum používající materiál pocházející ze žilní krve.

Je důležité dodržovat pravidla přípravy na testování na hepatitidu C - v tomto případě nebude dekódování všech indikátorů zkresleno. Celkový bilirubin je normálně 8,55–20,2 mmol / l a jeho zvýšení indikuje výskyt onemocnění jater. Hodnoty AlAT a AsAT se také zvyšují v případě hepatitidy B.

Albumin u zdravého pacienta je 35–55 g / l. Nízké hladiny plazmatických bílkovin ukazují na virový zánět jater.

Normální LDH index je v rozmezí 125–250 U / l a jeho růst znamená deformaci a destrukci buněk nemocného orgánu. Indikátor LDH (sorbitoldehydrogenáza) indikuje stav jaterní tkáně. Normální hodnota je 0–1 U / l. Rychlost růstu je charakteristickou složkou akutního průběhu hepatitidy B nebo jejího přechodu do chronického stadia.

Protein GGG má nízkou aktivitu v krevní plazmě.

Jeho růst je pozorován při zánětu jater a přetrvává po dlouhou dobu. Norma - 25–49 U / l pro muže, pro ženy je indikátor výrazně nižší - 15–32 U / l.

Dekódování příznaků chronické hepatitidy B

Identifikace markerů onemocnění jater je hlavním úkolem lékaře, který se snaží předcházet chybám v diagnostice. Je důležité vědět, že výsledky analýzy ovlivňují následující fyziologické faktory:

Tabulka antigenů a jejich dekódování umožní pacientovi získat představu o povaze onemocnění.

Typy PCR pro hepatitidu B a interpretace výsledků

Polymerázová řetězová reakce je typ krevního testu, který dokáže přesně detekovat virus hepatitidy B. Charakterem metody je, že je schopen prokázat HBV v raných stadiích - jeden měsíc po infekci, zatímco specifický antigen je detekován u pacienta až po 2 měsících.. PCR může detekovat nejen normální DNA virus, ale také mutantní kmeny, které žádná jiná analýza nemůže vidět.

Při dekódování PCR pro hepatitidu B jsou výsledky porovnány se standardními hodnotami. Na základě toho jsou učiněny závěry o přítomnosti onemocnění (pozitivní výsledek), koncentraci viru (aktivity) nebo nepřítomnosti onemocnění (negativní výsledek). Zpracování dat je 2 týdny.

Typy PCR pro virovou hepatitidu B

Existují 2 typy diagnostiky, které jsou předepsány pro hepatitidu B. Vysoce kvalitní PCR umožňuje s přesností 100% říci, zda je HBV v krvi nebo ne. Kvantitativní PCR ukazuje aktivitu viru, tj. Kolik DNA HBV je obsaženo v 1 ml krve.

Kvalitní PCR a její interpretace

Krevní test na hepatitidu B pomocí PCR může detekovat pouze přítomnost fragmentů DNA. V případě, že pacient má podezření na infekci HBV (HBV) nebo při jiných metodách diagnostiky, například sérologické testy neposkytují jasnou odpověď. Dekódování výsledků při provádění kvalitativní analýzy je velmi jednoduché:

• negativní výsledek - žádný virus;
• pozitivní výsledek - zjištěn virus.

Účelem vysoce kvalitní PCR je potvrdit nebo popřít přítomnost viru hepatitidy B a provést včasnou diagnózu. Pokud je HBV detekován během 1-2 týdnů po infekci, léčba bude co nejúčinnější. S aktivním vývojem HBV po dobu 2 měsíců a více se onemocnění stává chronickým a nemůže být zcela vyléčeno.

V případě, že vysoce kvalitní PCR pro hepatitidu je indikována přítomností viru, dalším krokem je provedení kvantitativní diagnostiky.

Kvantitativní PCR

Pro efektivní léčbu nebo vyhodnocení výsledků léčby nestačí pouze vědět, že pacient má HBV. Je nutné kvantifikovat hodnotu DNA viru hepatitidy B v 1 ml krve, tj. Virové zátěži na těle. Tento typ PCR pro hepatitidu B se provádí v následujících případech:

1. Před předepsáním léčby.
2. Posoudit účinnost léčby.
3. Určit vývoj rezistence na léčiva.
4. Určit fázi, ve které se choroba nachází.

Měřicí jednotka pro virus je mezinárodní jednotka (IU / ml) nebo počet kopií DNA / ml, tj. Počet fragmentů DNA na 1 ml krve. Poměr mezi oběma jednotkami závisí na vybraném testovacím systému a pohybuje se v rozmezí od 2 do 7 kopií / ml v 1 IU / ml. Pokud je systém neznámý, použije se pro konverzi průměrovaná hodnota:

1 IU / ml = 5 kopií / ml

Pokud se kvantitativní analýza provede okamžitě, je mezní míra pro diagnostiku onemocnění 75 IU / ml. Je-li výsledek nad tímto ukazatelem, je stanovena diagnóza HBV níže - HBV není detekován.

Léčba kvantitativní PCR

U hepatitidy B jsou následující hodnoty virové zátěže (virémie), kopie / ml, standardy PCR:

• 10 ^ 5 kopií / ml. Když je s velkou virovou aktivitou zvýšena hladina ALT častěji 2krát za šest měsíců, pak je antivirová léčba okamžitě předepsána.

Abychom zjistili, jak se bude chovat DNA hepatitida z hlediska chronicity, tj. Přechodu na chronickou formu z akutní, použijí se také výsledky PCR diagnostiky:

• HBV DNA 2 x 10 6 6 kopií / ml znamená, že získání chronické formy onemocnění je nevyhnutelné.

Příprava na průzkum

Pro stanovení přítomnosti HBV pomocí PCR se odebírá krev ze žíly. Procedura se provádí vždy přísně na lačný žaludek a je nejlepší dostat se do laboratoře ráno, kdy přirozený čas odpočinku z jídla je 8 hodin. Aby byly výsledky vyšetření správné, je nutné předem vědět, jak se správně připravit na kliniku. Další kroky jsou následující:

1. Odmítnutí z tukových potravin, kouření, alkoholu a sportu 12 hodin před zákrokem.
2. Než darujete krev, odpočiňte si 20 minut.
3. Před zahájením zákroku by měla být sestra upozorněna na užívané léky.

Pozor! Pokud se diagnóza provádí u dítěte mladšího 5 let, pak půl hodiny před zákrokem, měl by každých 10 minut vypít 1 sklenici vařené vody.

Shrnutí

Nejpřesnější metodou je dosud diagnostika PCR pro detekci hepatitidy B. Metoda umožňuje vidět skryté a mutované formy onemocnění, identifikovat nemoc v prvních týdnech po infekci, a tudíž provádět účinnou léčbu. V závislosti na situaci se provádí kvalitativní nebo kvantitativní PCR, která je zaměřena na detekci HBV a stanovení její aktivity. Chcete-li být testováni, musíte kontaktovat virologa, specialistu na infekční onemocnění nebo hepatologa.

Podstata analýzy PCR pro hepatitidu B a její výsledky

Virová hepatitida B je úspěšně léčena, pokud je včas detekována a je správně stanoven počet protilátek a antigenů v krvi pacienta. Pomocí enzymové imunoanalýzy hepatitidy je možné detekovat přítomnost virových markerů, ale nemohou určit přesný stupeň procesu.

Pro kvantitativní vyhodnocení byla použita PCR diagnostika. Pomocí testu je možné pomocí antivirových léků spočítat počet markerů, předpovědět průběh onemocnění a pravděpodobnost vyléčení.

Hlavní výhodou této studie je schopnost detekovat i minimální koncentrace viru, identifikovat patogen ve stadiu druhu.

Diagnostika hepatitidy B

Virus hepatitidy B je vysoce nakažlivý a odolný vůči vnějším vlivům. Zůstává aktivní v krvi pacienta po dobu několika týdnů. Proto je každá osoba ohrožena infekcí, i když je pozorována profylaxe.

Pro diagnostiku nemoci předepište následující studie:

Podstata metody PCR

Americký chemik K.Mullis obdržel Nobelovu cenu a jeho diagnostická metoda se stále používá.

Předchůdce metody PCR (polymerázová řetězová reakce) je považován za vědce z Norska H. Kleppeho. Nejprve začal provádět amplifikaci (obnovu) DNA pomocí krátkého řetězce DNA, tj. Syntetického primeru (druh kopie).

Nicméně, vědec nedokázal realizovat jeho nápad. Podobná studia byla dělána americkou chemik K.Mullis, kdo v roce 1993 získal Nobelovu cenu za jeho vynález. Od té doby, PCR byla používána založit otcovství, diagnostikovat genetická onemocnění a detekovat viry.

Podstatou reakce je, že pomocí enzymů se zkopíruje určitý kus DNA. Můžete kopírovat pouze oblast, která odpovídá zadaným parametrům a pokud je v prezentovaném vzorku. K zahájení reakce se používají následující složky:

1. Matrix DNA s místem, které má být zkopírováno.
2. Primery podobné struktuře DNA.
3. Polymeráza, tj. Enzym, který vyvolává reakci. Mělo by být termostabilní, tj. Odolávat teplotním extrémům.
4. Řešení s určitými parametry, zajištění průchodu reakce.

Reakce se provádí v několika stupních:

Pro detekci hepatitidy B se používají dva typy reakcí: kvantitativní a kvalitativní.

Kvantitativní PCR

Kvantitativní metoda určuje množství genomu HBV

Kvantitativní PCR zahrnuje současné vytváření kopií fragmentů DNA a stanovení počtu molekul. Měření se provádí po každé fázi, to znamená v reálném čase. Toho je dosaženo použitím fluorescenčních sond, které jsou zahrnuty v řetězci molekul a záře v určitém období studie.

Tato metoda se používá k detekci fragmentů DNA, které jsou markery viru hepatitidy. Pomocí kvantitativní metody je možné přesně izolovat genotyp viru. Jinými slovy se vypočítá počet kopií genomu HBV na počet buněk pacienta.

Kvantitativní analýza poskytuje odpovědi na následující otázky:

1. S jakou intenzitou onemocnění postupuje.
2. Jak účinná je léčba.
3. Vyvinula se rezistence na léky?

Kvantitativní měření je také nezbytné pro diagnostiku chronického stadia infekce. Pokud je množství DNA nižší než 100 ks / ml na normální úrovni transaminázy, pak je osoba nositelem viru.

V akutní fázi je množství protilátek mnohem vyšší, při antivirové terapii zvýšení počtu protilátek indikuje vývoj rezistence na léčivo, což je signál pro úpravu léčby.

Vysoce kvalitní PCR

Vysoce kvalitní PCR poskytuje méně informací, ale může eliminovat infekci.

Vysoce kvalitní PCR může pouze prokázat přítomnost patogenu v krvi. Pokud jsou nepřítomni, pacient není infikován, pokud patogen vstoupí do krve, výsledek bude pozitivní.

S pomocí kvalitativní reakce však není možné objasnit genom viru, stadium nemoci. Pro diagnostiku HBV proto bylo provedeno kvantitativní i kvalitativní měření.

Příprava na průzkum

Pro analýzu PCR je nutná žilní krev. To musí být provedeno ráno nalačno.

Pacient by se měl na studii řádně připravit:

1. Po dobu 10 hodin odmítnout jídlo, můžete pít pouze čistou vodu.
2. V předvečer přestat užívat alkohol, po dobu 4 hodin nekouřit.
3. Před vyšetřením se vyvarujte fyzického a emocionálního stresu.
4. Přestat užívat léky po dobu 2 dnů, pokud to není možné, je nutné informovat laboratorního technika. Některé drogy mají vliv na konečný výsledek.

Interpretace údajů

V kvantitativní reakci jsou získané indikátory vyhodnoceny v závislosti na počtu kopií DNA.

Je snadné interpretovat data měření kvality. On dává buď pozitivní nebo negativní odpověď.

V kvantitativní reakci lze získané indikátory odhadnout v závislosti na počtu kopií DNA. Měrnou jednotkou jsou kopie / ml.

Data se dekódují následovně:

1. Pokud je množství DNA HBV menší než 90, pak infekce chybí. U pacienta se vyvinula imunita po očkování, nebo byl vyléčen z nemoci.
2. Když se počet kopií 2x100 hovoří o nosiči viru.
3. Počet 2x106 označuje chronické stadium onemocnění.
4. U DNA více než 2x109 má pacient akutní stadium hepatitidy.

Chybné výsledky

Výhody diagnostické metody využívající polymerázové reakce jsou následující: t

1. Přímá detekce patogenů. Naproti tomu ELISA poskytuje informace o přítomnosti protilátek proti viru.
2. Specifičnost. To znamená, že je to DNA oblast, která je přítomna ve vzorku biomateriálu, který je kopírován.
3. Přecitlivělost. Metoda může dokonce detekovat fragmenty jednotlivých buněk.
4. Diagnostika onemocnění v akutních a latentních stadiích. To znamená, že onemocnění je možné diagnostikovat ve stadiu preklinických projevů.

Metoda má nedostatky, které vedou k falešným výsledkům. Nejvýznamnější nevýhodou je pravděpodobnost kontaminace materiálu. Hlavním zdrojem kontaminace jsou špatně zpracované zkumavky, laboratorní ruce, reagencie.

Část DNA z předchozí reakce může vstoupit do krve. Laboratoře proto kladou zvýšené hygienické požadavky: oddělené místnosti, plastové trubky, ultrafialové zpracování laboratoří atd.

Falešně negativní výsledky mohou být způsobeny sníženou citlivostí reakce. To se děje v následujících situacích:

• pacient užívá léky, například antikoagulancia;
• člověk před analýzou utrpěl fyzickou zátěž (sport, tvrdá práce);
• v nedávné době.

Pokud má pacient vysokou pravděpodobnost infekce a výsledek studie je negativní, musí být znovu vyšetřen.

Viz také:

Závěr

Metoda polymerázové řetězové reakce je hlavní a nejinformativnější pro diagnostiku HBV. To umožňuje nejen stanovit stav nositele infekce, ale také objasnit stadium onemocnění, vyhodnotit výsledky léčby.

Pro přesnější diagnostiku se používá kvalitativní a kvantitativní měření. Nevýhodou metody je pravděpodobnost kontaminace, snížená citlivost a poměrně vysoká cena.

Aby výsledky byly nejspolehlivější, je třeba se na studii řádně připravit a provádět ji na klinice s příslušnou licencí a dobrou pověstí.

DNA hepatitidy B a PCR

Testy DNA a PCR viru hepatitidy B jsou nejcitlivějšími testy, které detekují stopy molekulární DNA v játrech, které identifikují přítomnost viru. Podstata metody spočívá ve vícenásobném kopírování fragmentu DNA patřícího k původci onemocnění.

PCR typu Hepatitis B je polymerázová řetězová reakce externího chemického činidla se zkoumaným biologickým materiálem, zaměřená na identifikaci molekul virové DNA v krvi a jejich kvantitativních ukazatelů na jednotku objemu. Analýza je přiřazena v následujících případech:

• jestliže se u pacienta objeví příznaky hepatitidy B;
• během diagnostických činností pro smíšenou hepatitidu;
• objasnit účinnost léčby.

Pro PCR analýzu se odebírá žilní krev. Před studiem byste se měli zdržet konzumace asi 8 hodin.

Normální výsledek při detekci DNA ve viru je považován za „nedetekovaný“. To znamená, že virus není přítomen v krvi nebo jeho obsah je zanedbatelný. Konečnou diagnózu může provést pouze odborník na základě komplexní biochemické a imunologické analýzy krevní plazmy pro hepatitidu typu B. Lékař předepíše léčebný cyklus. Samoléčba zahrnuje příliš mnoho rizika.

Pro analýzu PCR se provádí odběr vzorků žilní krve.

Metoda PCR umožňuje detekci DNA patogenu i při jeho minimální přítomnosti ve vybraném vzorku krve. Kromě toho analýza umožňuje detekovat antigeny, které již byly vyvinuty pro virus. Každý z těchto antigenů indikuje specifické stadium onemocnění:

• HBsAg - virus je přítomen v tuto chvíli.
• Anti-HBcor - patogen v současné době chybí, ale byl v minulosti.
• Anti-HBs - v krvi jsou protilátky proti hepatitidě B (jako opce - herpes, HIV, chlamydie, mykoplazmóza, kandidóza, tuberkulóza, klíšťová encefalitida a mnoho dalších onemocnění).

Patologie a její znaky

Hepatitida B nebo HBV je virová infekce, která postihuje jaterní buňky. Je nebezpečný nejen přímým působením na parenchyma orgánu, což oslabuje bariérovou funkci a celkovou imunitu. Jsou možné závažnější následky, jako je cirhóza jater a výskyt zhoubných novotvarů.

HBV se přenáší skrze krev osoby infikované hepatitidou, jeho exkrementy, kontaktem se sliznicemi, zejména během pohlavního styku, kožními lézemi, nesterilními injekčními stříkačkami během krevní transfúze nebo během operací břicha. Novorozenec může být nakažen jeho nemocnou matkou, když se dotkne trhlin v bradavkách.

Následující příznaky jsou charakteristické pro hepatitidu B:

Neobvyklá únava

• zvýšení únavy při nízkém zatížení;
• neobvyklá únava;
• těžkost v pravém hypochondriu;
• snížená chuť k jídlu, nevolnost;
• žloutnutí kůže, sklera očí;
• světlé výkaly;
• tmavá moč;
• bolest v kloubech.

Inkubační doba, po které se tyto příznaky začnou objevovat, je od jednoho do šesti měsíců. Toto je období akumulace virových buněk v krevním oběhu jater. Když jejich koncentrace dosáhne kritického množství, virus se prolomí membránami hepatocytů a nadále se rozmnožuje uvnitř buněk. Jako výsledek, jaterní buňky umírají, cirhóza se vyvíjí, který, v nepřítomnosti vhodných léčebných opatření, přiměje pacienta, aby byl smrtelný. Včasný krevní test pro PCR a DNA hepatitidy B pomáhá vyhnout se negativním.

Indikace pro PCR jsou:

• pozitivní test DNA potvrzující diagnózu hepatitidy B;
• akutní a chronická hepatitida;
• smíšená hepatitida;
• kvantitativní stanovení viru v krevním séru;
• rozvoj taktiky účinné terapie.

Příprava na analýzu

Příprava na diagnostiku pomocí PCR je určena typem biomateriálu. Takže krev a moč darují jen ráno, na prázdný žaludek. Z urogenitální oblasti byly také odebrány šmouhy a škrábance. Jediným omezením pro ženy je menstruace. Sex je omezen na obě pohlaví v předvečer výzkumu.

Výsledky PCR lze považovat za spolehlivé pouze v případě, že je pacient řádně připraven k zákroku. Tato studie předpokládá následující podmínky:

• plný duchovního pohodlí, nepřítomnost jakéhokoli vzrušení. Aby bylo možné tuto analýzu předat i doma. Je nutné pouze zavolat lékaře s příslušným vybavením;
• abstinence od jídla, alkoholu, kouření, fyzické aktivity nejméně 8-12 hodin před analýzou, jinak budou výzkumná data zkreslená;
• 15-20 minut úplné relaxace před odběrem krve;
• přerušení léčby (pokud to není možné, měla by být laboratoř upozorněna);
• děti mladší než pět let před půlhodinou před analýzou by měly dostat vařenou vodu k pití v malých porcích.

Jaká je studie

PCR analýza je založena na principech používaných molekulární biologií. Jedná se o použití speciálních enzymů, které štěpí a replikují části DNA a RNA infekčního agens, který se nachází v krvi. Po této operaci jsou získané vzorky identifikovány v databázi dostupné v laboratoři. Současně je detekován typ infekce a koncentrace patogenu v krvi.

Pro tuto studii se používá zesilovač - termostat schopný ohřevu a chlazení trubek s biomateriálem. To je nezbytné pro aktivaci procesů replikace. Přesnost analýzy závisí na přesnosti teplotních parametrů.

Výsledky dekódování

Pozitivním výsledkem pro pacienta je, že laboratorní závěr „nebyl detekován“. To znamená, že v krvi není přítomna DNA hepatitidy B. V numerickém vyjádření je to přibližně 120 IU / ml nebo 200 kopií na stejnou jednotku objemu krve. Tato hodnota je normou. Požadavek na biologický materiál spočívá v tom, že by neměl být kontaminován.

Dekódování dalších výsledků analýzy umožňuje provést následující diagnózy:

• Koncentrace DNA hepatitidy B v krvi je více než 200 kopií, ale pod kritickou hladinou. Závažná patologie chybí.
• Viremie v mírné formě, až 500 kopií na ml. Volba léčby závisí na ukazatelích jaterní biopsie a stupni zhoršení jejích funkcí.
• Zvýšená koncentrace viru (více než 500 kopií / ml). Zánětlivý proces v aktivní fázi vyžaduje intenzivní antivirovou terapii.
• Maximální virová zátěž (více než 800 kopií na ml). Terapeutická opatření jsou vyvíjena na základě stavu pacienta a jsou plně zaměřena na maximální možné zlepšení.

Pro pacienta je dobrým výsledkem závěr "nedetekován"

Stanovení kvantitativních ukazatelů obsahu DNA hepatitidy B v průběhu PCR je základem pro volbu terapeutického průběhu. Po třech nebo šesti měsících se opět provedou testy, aby se ověřila účinnost antivirové terapie.

Funkce polymerázové řetězové reakce

V metodě PCR se používají dva přístupy ke stanovení DNA náležející k viru: kvalitativní a kvantitativní.

Kvalitativní přístup potvrzuje nebo popírá přítomnost hepatitidy B. PCR je předepsána na žádost pacienta, který má podezření, že je infikován infekcí HBV nebo v případě, kdy včasná diagnóza nedává jednoznačný výsledek jiným způsobem.

Pokud může být virus hepatitidy B detekován nejpozději dva týdny po jeho vstupu do těla, je s největší pravděpodobností pozitivní prognóza pro léčbu. V budoucnu onemocnění začne postupovat. Asi po dvou měsících vstoupí do chronické fáze. Úplné vyléčení v tomto případě bude nemožné.

Kvantitativní přístup k PCR se používá pouze při detekci viru. Vyhodnocuje:

• specifická virová zátěž na játra;
• intenzita progrese onemocnění;
• rezistence na antivirotika;
• účinnosti léčby.

Tyto ukazatele mají přímý praktický význam. Zvláště kvantitativní ukazatel DNA. Prognóza v akutní fázi hepatitidy B závisí na koncentraci viru v krevním oběhu jater, takže nízká koncentrace virových buněk téměř zcela vylučuje přechod akutní až chronické hepatitidy. Takoví pacienti nepředstavují nebezpečí pro ostatní. Vysoká virová zátěž přispívá k chronizaci patologického procesu a možnosti infekce hepatitidy u lidí, kteří jsou v kontaktu s pacientem.

Existuje také souvislost mezi koncentrací virových genů v krvi a cirhotickou degenerací jater a výskytem rakoviny jeho parenchymu.

PCR testy pomáhají lékaři detekovat nosiče viru.

Účinnost antivirové terapie je určena stupněm snížení koncentrace DNA hepatitidy B v cirkulaci jater. Dostatečným výsledkem je redukce virové zátěže 1-2 krát při intenzivní léčbě po dobu tří měsíců až šesti měsíců. Nižší sazby vyžadují změnu léčby.

Prognóza vývoje patologie a určení vhodné terapie pochází z: t

• kvantitativní objem DNA jaterního viru v krevním séru;
• související biochemické parametry (například hladina leukocytů v krvi a bilirubinu);
• markery virové infekce;
• výsledky biopsie jater.

Obecná PCR

Analýzy pomocí polymerázové řetězové reakce pomáhají lékaři:

• detekovat nosiče viru;
• predikci vývoje hepatitidy typu B;
• ujistěte se, že se onemocnění stává chronickým;
• sledovat aktivitu viru ve všech fázích vývoje;
• identifikovat mutantní a skryté kmeny hepatitidy B;
• vyhodnotit účinnost léčby viru při výběru určité taktiky a změnit ji v případě nedostatečného úspěchu.

Výhody metody

Na rozdíl od jiných testů používaných k diagnostice hepatitidy B má PCR:

PCR analýza je extrémně citlivá.

1. Výjimečná citlivost. Tato technika umožňuje výzkumníkovi detekovat původce onemocnění, i když je koncentrace jeho molekul DNA v krvi minimální. To vám umožňuje provádět preventivní a léčebná opatření v raném stádiu onemocnění, kdy zjevně není vyjádřena žádnými příznaky.
2. Široké pokrytí příležitostí. PCR může detekovat nejen původce virové hepatitidy B, ale také řadu dalších patologií.
3. Univerzálnost přístupů. Biomateriál pro výzkum může být krev, sliny, sliznice a kůže.
4. Účinnost. Závěr bude připraven přesně jeden den po odběru krve (výsledek analýzy bude proveden nejpozději do 7 hodin).
5. Důvěryhodnost. Za všech podmínek PCR metody nikdy nevykazuje falešná data.
6. Studie cenové dostupnosti. Při nákladech je PCR pouze o něco vyšší než obvyklé testy, které používají krev jako biomateriál.

Jedinými náklady na výzkum je jeho technologická složitost. Pro vysoce kvalitní implementaci PCR je zapotřebí extrémně čistý biomateriál, moderní vybavení a dobře vyškolený personál. Je vhodnější použít pro diagnostiku pomocí této metody specializované laboratoře.

Virová hepatitida B označuje nemoci, jejichž úplné vyléčení je možné pouze v nejranějších stadiích vývoje. Identifikace onemocnění v této fázi pomáhá přecitlivělé diagnóze pomocí PCR. První příznaky, které způsobují podezření na poškození jater virem, by měly být důvodem k konzultaci s odborníkem. Pokud je diagnóza potvrzena, léčba by měla začít okamžitě. To zlepší prognózu a zvýší pravděpodobnost podpory jater ve zdravém stavu po mnoho let.